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神经病理性痛是一种常见的临床顽症,它所引起的生理、心理和社会问题已严重阻碍了现代人群生活质量的提高,业已成为医学和生物学中最富挑战的问题之一。迄今为止,治疗神经病理性痛的药物和手段多为简单对症,又或针对单一机制,效果不佳且副作用大。因此,深入探讨机制和开发新型针对多靶点的治疗药物/方法十分必要。神经损伤(外伤、炎症等)是神经病理性痛最主要的原因。研究证明,高压氧具有较强的神经保护作用,可减轻或消退神经组织水肿、改善组织供氧、促进周围神经再生、抑制炎症反应。我们实验室在国际上首先证实高压氧预处理能够诱导脊髓缺血耐受。此外,中药在我国具有悠久的历史,由于其良好的生理效应及毒副作用少等优点,广泛应用于临床。我们前期研究发现中药(参扶、川芎嗪等)亦可减轻脑、脊髓缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。那么,高压氧和中药能不能早期治疗损伤,晚期重建“平衡”,抑制神经病理性痛的产生,缓解维持期神经病理性痛呢?本研究拟采用坐骨神经慢性缩窄性损伤模型(CCI model),运用神经行为学等研究方法,探讨高压氧和参扶注射液对神经病理性痛的影响,初步探讨其可能的机制,旨在开发有效、无创、多靶点、副作用小的全新的治疗神经病理性痛的临床手段。第一部分高压氧对神经病理性痛的影响及其机制初探实验一早期高压氧治疗对CCI大鼠神经病理性痛发生的影响及其机制初探目的观察早期高压氧治疗对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠神经病理性痛发生的影响,并初步探讨其可能机制。方法SD大鼠84只,随机分为7组(n =12):①假手术组(sham组);②对照组(CCI组),即单纯行CCI手术组;③高压空气组(HBA组),本组动物于CCI术后4小时即行3.0 ATA、21% O2高压空气治疗,连续7d,1次/d;④纯氧组(O2组),本组动物于CCI术后4小时即行1.0 ATA、100% O2治疗,其余参数同高压空气组;⑤高压氧A组(HBOA组),本组动物于CCI术后4小时即行1.5 ATA、100% O2高压氧治疗,连续7d,1次/d;⑥高压氧B组(HBOB组),本组动物于CCI术后4小时即行2.0 ATA高压氧治疗,其余参数同高压氧A组;⑦高压氧C组(HBOC组),本组动物于CCI术后4小时即行3.0 ATA高压氧治疗,其余参数同高压氧A组。术前2d和术后第3,7,10,14d,其后每隔7d分别测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)。结果(1)CCI组、sham组、HBOC组各组间MWT,TWL比较均存在显著差异(RM ANOVA by post hoc LSD,P<0.01)。与sham组比较,CCI组术后各时间点的MWT显著降低,TWL明显缩短(One-way ANOVA,P<0.01)。(2)HBOC组大鼠术侧后肢术后MWT各时间点数值较sham组明显降低,但均显著高于CCI组(RM ANOVA by post hoc LSD,P<0.01)。HBOC组大鼠术侧后肢的TWL在术后各时间点也都显著高于CCI组(RM ANOVA by post hoc LSD,P<0.01),与sham组相较,HBOC组大鼠的TWL在第3,7,10,14日明显缩短(One-way ANOVA,P<0.01),但自第21日起则恢复至正常。(3) HBOC组与HBA组、O2组各组间MWT,TWL比较均存在显著差异(RM ANOVA by post hoc LSD,P<0.01)。HBOC组大鼠术侧后肢术后MWT,TWL各时间点数值均显著高于HBA组和O2组(One-way ANOVA,P<0.01)。(4)HBOC组与HBOA组、HBOB组各组间MWT,TWL比较均存在显著差异(RM ANOVA by post hoc LSD,P<0.01)。HBOC组大鼠术侧后肢术后MWT,TWL各时间点数值均显著高于HBOA组和HBOB组(One-way ANOVA,P<0.01)。结论早期高压氧治疗能有效抑制CCI大鼠热、机械性痛敏的发生,3ATA高压氧的镇痛效果优于1.5、2.0ATA,其镇痛作用是高压、高氧因素共同作用的结果。实验二晚期高压氧治疗对CCI大鼠维持期神经病理性痛的影响目的观察晚期高压氧治疗对CCI大鼠维持期神经病理性痛的影响。方法SD大鼠28只,测定TWL、MWT基础阈值后,行CCI术。筛选机械性异常痛觉和热痛敏表现明显的CCI大鼠(排除神经病理性痛不明显的大鼠9只),再将之随机分为两组:①对照组(CCI组,n =9),即单纯行CCI手术组;③高压氧治疗组(HBOT组,n =10),本组动物于CCI术后第14日行3.0 ATA、100% O2高压氧治疗,连续3d,1次/d。各组大鼠均于术前2d和术后第7, 14,17, 21, 24, 28日分别测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)。结果HBOT组与CCI组相比, MWT和TWL之间均存在显著差异(RM ANOVA by post hoc LSD,P<0.01)。与CCI组相比,HBOT组术后大鼠术侧后肢的MWT在第17,21,24日显著增高,TWL在第17,21,24日明显延长(One-way ANOVA,P<0.01)。结论晚期高压氧治疗可显著缓解CCI大鼠维持期的热、机械性痛敏,且高压氧治疗结束后,其有效时间可维持7d左右。实验三高压氧预处理对CCI大鼠神经病理性痛的影响目的观察高压氧预处理对CCI大鼠神经病理性痛的影响。方法SD大鼠24只,随机分为3组(n =8):①假手术组(sham组),除不结扎神经外,其余操作同HBOp组;②对照组(CCI组),即单纯行CCI手术组;③高压氧预处理组(HBOp组),本组动物于CCI术前行3.0 ATA、100% O2高压氧治疗,连续7d,1次/d,末次高压氧处理后24小时行CCI手术。各组大鼠均于术前8,1d和术后第3,7,10,14日以热辐射法测定大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)以评价大鼠热痛觉过敏。结果HBOp组与CCI组、sham组之间的TWL比较均存在显著差异(RM ANOVA by post hoc LSD,P<0.01), HBOp组的TWL虽明显低于sham组,但在术后第3,7日却显著高于CCI组。结论高压氧预处理能有效延迟CCI大鼠热痛敏的发生。第二部分参芪扶正注射液对CCI大鼠神经病理性疼痛的影响目的探讨早期给予参芪扶正注射液能否抑制CCI大鼠神经病理性疼痛的发生。方法SD大鼠32只,随机分为4组(n =8):①假手术组(sham组);②对照组(CCI组),即单纯行CCI手术组;③CCI+生理盐水组(CCI+saline组),本组动物于CCI术后立即腹腔注射生理盐水25ML/kg,连续7d,1次/d;④CCI+参附组(CCI+ShenFu组),本组动物于CCI术后即刻腹腔注射参芪扶正注射液,剂量25ML/kg,连续7d,1次/d。于术前2d,术后1,3,7,10,14d分别测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)。结果与Sham组比较,CCI组和CCI+Saline组术后各天TWL,MWT明显降低(P<0.01),其MWT从术后第1日即开始下降,第7日降至最低值(为基础值的19.7%和18.1% ,与基础值比较均P<0.01);其TWL从术后第1日即开始缩短,第3日即缩短至最低值(为基础值的58.4%和60.2% ,与基础值比较均P<0.01),CCI组和CCI+Saline组两组间差异无统计学意义。与CCI,CCI+Saline组相比,CCI+ShenFu组在术后第1,3,7日的MWT值明显提高(P<0.01),术后第1日TWL值明显增加(P<0.01)。结论早期给予参芪扶正注射液可以轻度延缓CCI大鼠机械性痛敏的形成,抑制术后第1日的热痛敏。小结1.早期高压氧治疗能有效抑制CCI大鼠热、机械性痛敏的发生;3ATA高压氧的镇痛效果优于1.5ATA和2.0ATA;早期高压氧治疗的镇痛作用是高压、高氧因素共同作用的结果。2.晚期高压氧治疗可显著缓解CCI大鼠维持期的热、机械性痛敏,且高压氧治疗结束后,其有效时间可维持7d左右。3.高压氧预处理能有效延迟CCI大鼠热痛敏的发生。4.早期给予参芪扶正注射液可以轻度延缓CCI大鼠热、机械性痛敏的发生。