【摘 要】
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含水稻几丁质酶基因G11的质粒pAHG11经酶切鉴定发现其中GaMV35S-G11片段与pAHG11的图谱相反,因此将质粒pAHG11?命名为pAHG11(-).从pAGH11(-)中分离出G11和pUbi-bar-Nos3片段,
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含水稻几丁质酶基因G11的质粒pAHG11经酶切鉴定发现其中GaMV35S-G11片段与pAHG11的图谱相反,因此将质粒pAHG11?命名为pAHG11(-).从pAGH11(-)中分离出G11和pUbi-bar-Nos3片段,定向取代经酶切鉴定pBI121中的gus编码序列,得到含G11和bar基因的双元表达载体pBI-GB,经酶切鉴定连接方向与予期图谱一致.双元表达载体pBI-GB通过冻融法导入根癌农杆菌系C58(pMP90)得到工程农杆菌系C58(pMP90,pBI-GB).通过根癌农杆菌C58(pMP90,pBI-GB)成功地将水稻几丁质酶基因G11导入烟草(Nicotiana tabacum)品种K358,得到转基因烟草Ro代28株,经PCR检测证明T-DNA已整合入烟草基因组,Western杂交和除草剂Liberty抗性检测显示G11和bar基因在转基因烟草Ro代中均能表达.转基因烟草Ro代植株正常结实,3株Ro代植株的子一代转基因烟草经Km、除草剂Liberty抗性和Western杂交检测表明nptⅡ、bar和G11基因已传至R1代并表达,且呈现单拷贝3:1孟德尔分离.经抗病性初步检测,表达水稻几丁质酶的子一代转基因烟草幼苗表现出对烟草赤星病(A.alternata)的抗性.
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