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本实验于2005年9月至2008年3月,采用急性毒性方法,研究了不同浓度的镉(Cd2+)和铅(Pb2+)对长江华溪蟹(Sinopotamonyangtsekiense)主要组织器官线粒体的影响。按照《中华人民共和国渔业水质标准》(Cd2+<0.005 mg/L、Pb2+<0.05mg/L)的10倍、20倍、100倍、200倍和1000倍设置染毒浓度,Cd2+:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L; Pb2+:0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、50 mg/L,实验同时设对照组。 在96h,用分光光度计法分别检测了Cd+、Pb2+对心脏和肝胰腺线粒体膜通透性(MPT)、线粒体膜肿胀度、线粒体膜结合酶Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase的变化。 结果表明,Cd2+、Pb2+可使心脏和肝胰腺细胞中线粒体膜通透性明显增大,膜肿胀度增加;心脏中ATPase活性在低浓度组先升高,之后随着染毒浓度增加而降低,肝胰腺中ATPase活性始终在降低,膜结合酶活性受到明显抑制。 分别在24h、48h、72h、96h,对心脏、肝胰腺细胞中线粒体外膜、基质、内膜的标志酶,即单胺氧化酶(MAO)、苹果酸脱氢酶(MDH)和细胞色素氧化酶(CCO)活性的影响进行了研究。结果表明,随Cd2+、Pb2+浓度的增加和处理时间的延长,MAO、MDH、CCO的活性呈现先升后降的趋势,剂量-效应关系明显。其中高浓度Cd2+组(5 mg/L)对心脏抑制作用明显,对肝胰腺的MAO、MDH活性影响不大,在96h呈现回归趋势。高浓度Pb2+组(50 mg/L)一直表现为明显的抑制作用,剂量-效应关系明显。另外,不同浓度的Cd2+、Pb2+对不同组织线粒体酶活性有一定差异,心脏比肝胰腺对胁迫更加敏感。当Cd2+浓度为5 mg/L时,分别在处理时间48h、96h、72h,心脏相对应的MAO、MDH与CCO活性分别降到最小值;在Cd2+浓度为1 mg/L时,分别在处理时间24h、96h,肝胰腺相对应的MAO、MDH活性分别减至最小值,较对照组差异显著(P<0.05)。Pb2+浓度50 mg/L、96h,心脏、肝胰腺的MAO活性、心脏的MDH与CCO活性跌到最小值,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法,检测了Cd2+处理96h对肝胰腺、鳃和心脏中细胞色素氧化酶(CCO)和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶的影响。 结果显示,随着Cd2+浓度的增加,肝胰腺、鳃、心脏中CCO和MDH同工酶有显著变化,包括酶带数和酶带强弱的变化;Cd2+对肝胰腺和鳃中CCO和MDH同工酶具有明显的激活效应,但是对心脏的CCO同工酶却有抑制作用;心脏中CCO、MDH同工酶均出现了特异的标记酶带。 结论:镉、铅可使长江华溪蟹主要组织器官线粒体的结构和功能发生变化,导致线粒体产生明显且不可逆转的损伤;线粒体酶的变化在一定程度上可作为水生动物逆境胁迫的生化指标。