象耳豆根结线虫寄生基因CDC48的分离与鉴定

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象耳豆根结线虫(Meloidogvne enterolobii)是一种热带地区作物的重要病原线虫之一,它寄主范围广,繁殖率高,毒性大,可寄生携带Mi抗性基因的番茄(Solanumlycopersicum)和辣椒(Capsi-cum frutescens)。随着分子生物学研究的深入,运用分子生物学技术研究其致病机理以及寻找控制该病害的方法成为可能。本文以象耳豆根结线虫为材料,首次克隆象耳豆根结线虫CDC48蛋白编码基因,并用RNA干扰技术初步鉴定基因功能,得到的主要结论如下:  1.利用RACE和TAIL技术,首次获得象耳豆根结线虫细胞周期相关基因cDNA全长2654bp,命名为Me-cdc48,推测编码817个氨基酸。DNA编码区全长3200bp,包含11个内含子。与该基因同源性较高的南方根结线虫Meloidogyne incognita的CDC48类似蛋白:MiV1ctg69最大相似度为91%,与秀丽小杆线虫Caenorhabditis elegan和Caenorhabditis remanei编码的CBN-CDC-48.2 protein(登录号为XP-003117518.1)以及Caenorhabditis briggsae编码的CDC48类似蛋白(登录号为:XP-002630310.1)最大相似度都为85%,与猪蛔虫Ascaris suum编码的cdc-48.2protein(登录号为NP495705.1)最大相似度为84%。  2.发育表达分析结果表明,Me-cdc48基因在象耳豆根结线虫四龄表达量最高,三龄次之,二龄期则表现出最弱的现象。  3.通过RNAi分析表明该基因在线虫侵染寄主初期有较大影响,表现在5d,10 d,侵染数量较之20 d、30 d数量有明显差异性。随着时间推移,干扰效果渐弱,侵染数量差异也趋于降低。  本文为植物寄生线虫的基因功能组学研究打下了基础,为进一步寻找防治和控制象耳豆根结线虫的方法提供了新的依据。
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