目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种可定植于人胃粘膜表面的革兰氏阴性菌,现已证实Hp感染与慢性胃炎、消化性溃疡和胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)发生密切相关。现行推荐的根除Hp感染的治疗方案(抗生素联合质子泵抑制剂或铋剂)虽然有效,但存在耐药菌株增加和药费昂贵等不可避免的问题。据文献报道,免疫接种对Hp感染同时具有预防和治疗的作用,因此,疫苗的研制己成为全球Hp研究的热点。在疫苗研究中,筛选有效的免疫抗原是关键性的环节。目前大多数疫苗采用的是与Hp致病相关的毒力因子作为抗原成分,如尿素酶(urease)、热休克蛋白(heat shock protein, Hsp)、空泡毒素(vacuolating cytotoxin, VacA)、细胞毒素相关抗原(cytotoxin associate antigen,CagA)、中性粒细胞激活蛋白(neutrophil-activating protein, NAP)等。革兰氏阴性细菌外膜蛋白具有良好的抗原活性,这些外膜蛋白作为抗体和免疫细胞攻击的主要靶标,可以介导对细菌最直接有效的杀灭作用,是决定免疫反应是否对人体具有保护性的关键因素。Lpp20、AhpC和UerB都是Hp的外膜蛋白成分,其编码基因具有高度保守性,也是Hp疫苗重要的免疫抗原。但一直令学者们遗憾的是每种抗原单独免疫动物时,获得的保护率均不是很高,而多种抗原联合免疫才能达到较好的效果。因此,本研究拟对Hp外膜蛋白Ahpc和Lpp20基因进行克隆表达,在此基础上,将这两个外膜基因分别与Hp保护性抗原成分尿素酶B亚单位的活性片段(UreB414)和粘膜佐剂-大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)构建融合基因。通过不同表达系统得到多亚单位的融合蛋白,分别观察在小鼠体内诱导的不同免疫应答和保护作用,为筛选有效的Hp疫苗抗原奠定基础。方法:1、采用PCR方法从Hp CQ9803基因组中扩增lpp20、ahpC基因片段并构建在原核表达载体pET-22b(+)中,通过酶切、测序鉴定阳性重组子。应用生物信息学软件DnaStar和Genbank数据库分别对已公布的Hp ahpC和lpp20基因序列进行相似性分