松材线虫是松树萎蔫病(Pine wilt disease)的病原,通过介体天牛传播病害,自1982年在江苏南京首次发现后,目前松材线虫已经蔓延至我国14个省(自治区、直辖市)的192个县级行政区,使我国松林资源与生态平衡遭到严重破坏,经济损失巨大。目前对松材线虫的研究主要集中在松材线虫的生物学、分类鉴定、松材线虫病发生条件和防治方法等方面,而关于松材线虫致病性的分子机理知之甚少。乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)是生物神经传导中的一种关键性酶,除了神经学功能外,还可能涉及细胞凋亡和寄生线虫细胞发育、行为调控及侵染致病等多个生理进程。松材线虫AChE基因克隆的相关研究尚未见报道,本论文通过反转录PCR (RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得了松材线虫AChE基因Bx-ace-2的cDNA全长,研究了该基因的内含子及外显子的排列结构；通过Southern杂交技术检测了该基因在基因组中的拷贝数；通过氨基酸序列比对分析,构建了乙酰胆碱酯酶基因的进化树；利用RNAi技术对克隆的Bx-ace-2进行了松材线虫体外干涉的初步研究。研究结果为今后进一步开展对松材线虫乙酰胆碱酯酶基因功能分析,从而推进对松材线虫致病分子机制的理解打下基础。1松材线虫乙酰胆碱酯酶基因Bx-ace-2克隆和分析克隆的Bx-ace-2 cDNA全长为2010 bp,有1878 bp的开放阅读框(ORF),推测其编码的蛋白有625个氨基酸；Bx-ace-2基因组克隆长为2192bp,含有7个内含子,Southern杂交实验表明该基因在松材线虫基因组中以单拷贝存在。氨基酸序列比对和同源性分析显示,Bx-ace-2编码的乙酰胆碱酯酶与已报道的秀丽小杆线虫ACE-1、ACE-3和ACE-4型乙酰胆碱酯酶的相似性在28%-31%之间,而与秀丽小杆线虫ACE-2及甘薯茎线虫、南方根结线虫、大豆胞囊线虫、马铃薯白线虫和胎生网尾线虫的ACE-2型乙酰胆碱酯酶的氨基酸序列相似性在44%-52%之间；构建的系统进化树也显示了松材线虫乙酰胆碱酯酶与其它线虫的ACE-2型乙酰胆碱酯酶具有相对更近的遗传距离,因此推测该松材线虫乙酰胆碱酯酶也属于ACE-2型。2松材线虫乙酰胆碱酯酶基因Bx-ace-2的RNAi研究研究了松材线虫吞咽FITC过程,浸泡10 h后松材线虫吞咽明显,24 h后线虫全身荧光信号最强。以Bx-ace-2 cDNA为模板,体外转录合成dsRNA,对经过不同dsRNA浸泡液处理24小时后的松材线虫进行RT-PCR检测显示,ace dsRNA浸泡处理后的松材线虫Bx-ace-2的转录水平明显降低,而经gfp dsRNA浸泡处理后的松材线虫没有检测到Bx-ace-2的转录水平变化。对处理后线虫的表型观察显示,ace dsRNA浸泡处理对松材线虫的活力没有明显影响,同时未发现线虫的贲门收缩的差异；浸泡液中加入脂质体对RNA干涉作用的影响不明显；松材线虫的灰葡萄孢接种实验显示经ace处理的松材线虫繁殖力明显低于对照。