中国卤虫(Artemia sinica)是甲壳动物中重要的饵料生物和实验动物。卤虫在遭遇恶劣环境时,其生长发育会停止并形成滞育卵以躲避不良环境。当生存条件适宜时,胚胎的发育重新启动,在这一过程中必然伴随着与胚胎滞育有关蛋白质的降解。蛋白质降解包括泛素化、溶酶体、Caspase等多条途径,其中泛素化蛋白酶降解途径是研究的比较广泛的蛋白降解途径。泛素激活酶E1利用ATP水解释放的能量将泛素分子Ub活化,随后将活化的泛素分子传递给结合酶E2,紧接着E3连接酶将结合泛素的E2与目标蛋白相连,最后通过水解靶蛋白完成泛素化过程。本研究探究的是E3泛素连接酶复合物中SCF(Skp1-Cul1-F-box)的一个关键的骨架蛋白SKP1(S-phase kinase-associated-protein 1)在中国卤虫早期胚胎发育过程中的作用。SKP1可参与稳定F-Box的构象并介导蛋白质降解,在胚胎早期发育过程具有重要的作用,但目前SKP1在卤虫滞育过程中的调控作用及功能还不清楚。本研究首次克隆了中国卤虫As-skp1基因c DNA全长,基因序列号为:QGN75283.1,并对其进行了生物信息学分析。采用实时定量PCR法检测了As-skp1在中国卤虫胚胎发育各时期及在温度胁迫和盐度胁迫状态下m RNA的表达水平及表达模式,利用免疫印迹技术检测了As-SKP1,As-SKP2,As-CDK2以及As-CUL1在卤虫胚胎发育过程中蛋白表达模式及表达水平,依据免疫荧光技术检测了As-SKP1在中国卤虫的表达部位。利用小RNA干扰(small interfering RNA,si RNA)技术分析了As-skp1在中国卤虫早期胚胎发育过程中的作用及功能。实验结果显示,As-skp1全长659bp,编码163个氨基酸。As-skp1在中国卤虫胚胎发育过程中呈现先高后低的表达趋势,其相对表达量在发育至15 h时最高。蛋白表达水平与基因表达趋势变化基本相一致。As-SKP1的免疫荧光实验结果显示,无组织和器官的特异性。si RNA实验表明,As-skp1的敲低导致畸形率的升高。通过实验得到以下结论:As-skp1为细胞周期调控相关基因,在卤虫胚胎发育至15 h前高表达是因为胚胎启动后进行的细胞增殖和细胞分裂需进行大量的物质储备,胚胎发育到15 h后表达量下调,证明胚胎细胞相关活动减少,细胞开始分化,相关基因下调,最终维持在基础水平,实时荧光定量q PCR结果和Western blot结果都证实了这一结果。As-skp1被敲低后,会出现发育迟缓的现象,同时出现大量畸形胚胎。因此SKP1对于卤虫胚胎重启及滞育解除是重要的,对于SKP1的研究将有利于了解卤虫滞育卵的重启机制,分析泛素化降解蛋白质的作用途径,同时对卤虫资源的开发等具有潜在的应用价值。