论文部分内容阅读
目的 通过制备生物素化抗人肝癌单克隆抗体（HAb18-Bt）和Gd-DTPA标记的链霉亲和素（Gd-DTPA-SA），探讨Gd+3标记DTPA-链霉亲和素的最佳反应条件，并利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用，提高MR分子免疫成像的敏感性。 材料和方法 1．生物素化单克隆抗体的制备 将纯化的抗人肝癌单克隆抗体HAb18置于碳酸氢盐缓冲液中，4℃透析过夜，并用该缓冲液调节抗体浓度至1mg／ml。活性生物素酯NHS-LC-Biotin溶于无水二甲亚砜（DMSO）中，按生物素酯：抗体的摩尔比为30∶1进行反应，室温下持续轻轻摇晃1小时，使抗体与生物素充分交联。 采用HABA／Avidin试剂盒、直线外推法对抗体的生物素化程度及其活性进行测定。 2．选择不同pH值的碳酸氢钠反应体系（pH值分别为5、6、7、8）及不同DTPA-SA摩尔比率（1000、500、200、100），测定不同反应条件下的每个链霉亲和素分子所结合的Gd+3数目及Gd-DTPA-链霉亲和素的结合活性。 3．动物实验部分 20只荷人肝细胞癌裸鼠，分为三组，其中二步法预定位组8只，先静脉注射生物素化单克隆杭体600雌，24小时后腹腔注射8即gAV，30分钟后再静脉给予Gd一DTPA一SA;单克隆杭体一Gd-DTRA组6只，经尾静脉注射Gd一DTPA一HAb18; Gd一DTPA对照组6只，静脉注射Gd一DTPA。对实验动物行MR扫描，汉lJ量SE TIWI平扫及增强后10，、30，、60‘、3h、6h、12h、24h、48h图像内肿瘤、肝脏及肌肉的信号强度，绘制时间一信号强度曲线，并计算强化率、瘤/非瘤组织信号强度比及瘤组织与背景的对比度噪声比. 4.MR扫描完成后，腹腔注射过量戊巴比妥钠处死实验动物，将肿瘤、肝脏、’肾脏、脾脏等组织取出冷冻，按照几mat方法，选择342.249nm的Gd原子发射光谱，进行电感藕合高频等离子体发射光谱（ICP一AEs）酸消化法测量。组织对Gd的摄取量以注射对比剂剂量的百分比（%D）表示。结果 1.HAb18单克隆杭体经生物素化后，每个杭体分子平均可结合15个分子的生物素，其杭体结合活性约为91%。 2.随着反应体系pH值的增高，每个链霉亲和素分子所结合的Gd+，数目增高;当DT队一SA摩尔比率低于500时，SA一DTPA联结Gd的数目随着DTPA一SA摩尔比的增高而增高;而当摩尔比率为1000时，则出现下降，其中在pH 8.0 NaHCO3缓冲体系内，cDTPA与链霉亲和素的摩尔比为500:1的条件下，每分子链霉亲和素平均结合15.6个分子的Gd一DTPA，与其它各组有显著性差异。各实验组Gd一DTPA一SA复合物的生物素结合活性无明显差异。 3.二步法预定位组中，肿瘤信号强度缓慢升高，在增强后第6小时，肿瘤的强化率、肿瘤一肌肉信号比值及CNR达到最大值，与其它两组有显著性差异。肝脏和肌肉表现为轻度强化，约在注射对比剂1小时的强化程度最大，与平扫有差异。 注射单克隆抗体一Gd一DTPA后，肿瘤表现为缓慢轻度强化。24小时后，肿瘤强化率达13 .5%，肿瘤一肌肉信号比、CNR与平扫信号强度有统计学差异（p<0.05）。单克隆抗体对照组的肝脏和肌肉表现为轻度强化。 Gd一DT队对照组内，肿瘤、肝脏、肌肉均表现为快进快出特点。 4.ICE一AEs显示二步法预定位组中肿瘤摄取Gd+3的含量最高，与 一3-其它各组有显著性差异.结论 1.单克隆杭体在结合一定数量的生物素分子后，仍可保持较高的活性。 2.链霉亲和素分子所结合的Gd+，数目依赖于反应体系的pH值及DTPA环醉一蛋白的摩尔比值，而Gd.DTPA一SA的生物素结合活性与反应条件无关。 3.二步法预定位技术对肿瘤有特异性增强作用和信号放大效应，可提高靶瘤内Gd+3的浓聚，优于杭体直接标记法，为单克隆抗体MR分子免疫显像提供了新途径.