黄曲霉毒素(Aspergillus flavus toxin)是一类结构类似的化合物，其中以黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性最强。常规检测AFB1的方法有生物学方法、HPLC及薄层层析等方法；由于各方法的局限性，人们逐渐专注于应用免疫学方法进行检测。由于免疫学方法检测中需要使用酶，而酶本身的性质不稳定，容易出现假阳性或假阴性结果。为克服AFB1免疫学检测结果的不稳定性，本论文将绿色荧光蛋白质与抗AFB1单链抗体进行了融合表达，通过检测融合蛋白的荧光强度得到稳定的检测结果，为实现使用免疫学方法对AFB1稳定可靠的检测奠定良好基础。　　 绿色荧光蛋白质(Green fluorescent protein，GFP)最初是从维多利亚水母中分离得到，由于其荧光稳定、无毒害、易于构建载体等优点常作为报告基因，应用于基因表达及蛋白质定位。抗AFB1单链抗体(Single Chain Fragment Variable, ScFv)是由本研究室前期筛选获得，在以上ScFv及GFP基础上，本研究探索构建了8种不同的重组质粒，同时在大肠杆菌中进行了表达，经过筛选最终获得了既具有抗体活性又有荧光活性的双重活性的融合蛋白质。　　 本研究首先将筛选得到的抗AFB1的ScFv基因与GFP基因借助于一个linker进行连接，分别组成GFP-linker-ScFv与ScFv-linker-GFP，构建了重组质粒pET22b-ScFv-GFP、pET22b-GFP-ScFv、pET32a-ScFv-GFP、pET32a-GFP-ScFv。将构建成功的重组质粒转化入表达宿主大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行原核表达，经Ni-柱纯化后得到目标蛋白质，而后对融合蛋白的活性分别进行酶联免疫法(ELISA)检测与荧光显微镜检测。结果表明BL21(DE3)/pET22b-ScFv-GFP与BL21(DE3)/pET32a-ScFv-GFP的表达产物抗体效价分别为0.930与0.918，但二者均无荧光活性。而BL21(DE3)/pET22b-GFP-ScFv、BL21(DE3)/pET32a-GFP-ScFv的表达产物正好相反，即有荧光但无抗体活性。全细胞变性蛋白电泳结果表明，这四种重组蛋白在宿主菌内表达后可能发生了降解。　　 本课题组前期研究证实了ScFv的重链可变区VH具有识别抗原的能力，在此基础上本研究又构建了重组质粒pET22b-VH-GFP、pET22b-GFP-VH、pET32a-VH-GFP、pET32a-GFP-VH。将构建成功的重组质粒转化入E.coli BL21(DE3)中表达，经ELIA及荧光显微镜检测表明，BL21(DE3)/pET22b-VH-GFP产物的效价为0.915，但产物无荧光；BL21(DE3)/pET22b-GFP-VH的表达产物具有较强的荧光，效价仅为0.223。pET32a-VH-GFP、pET32a-GFP-VH能够在E.coliBL2(DE3)中表达较好的双重活性，抗体效价分别为0.920与0.506，纯化后的融合蛋白在波长488nm下激发，在495nm处发射出强度分别为1554、661.5的荧光，二者的表达量分别为145μg/L、131μg/L。　　 综上，本研究表明重组菌株BL21(DE3)(DE3)/pET32a-VH-GFP与重组菌株BL21(DE3)/pET32a-GFP-VH所表达的融合蛋白具有较好的抗原识别能力和荧光活性。若将所表达的融合蛋白质与抗原特异性结合，可以直接通过融合抗体所发射出的荧光初步定性地判断被检测物质是否含有AFB1，在此检测过程中不需要酶的参与，即克服了免疫学方法检测AFB1中出现假阳性或假阴性的现象，在定性检测的同时还可以借助专门的仪器如流式细胞仪对其进行定量分析，最终为融合抗体应用于食品中AFB1的直接快速检测奠定良好的基础。