甜高粱秸秆制取燃料乙醇发酵菌种的选育研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:linli8010
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甜高粱为短日照C4植物,光合效率是C3作物的28倍,具有耐干旱、耐水涝、抗盐碱等多重抗逆性及生物产量高,糖分积累快等特点。利用甜高粱发酵生产燃料乙醇,将会成为解决未来能源问题的一条有效途径。本论文对甜高粱秸秆固态发酵六碳糖的菌种选育及其发酵工艺做了研究;并利用发酵后的甜高粱秸秆作为原料制备饲料,为发酵后产物的再利用奠定技术基础;发酵后的甜高粱秸秆纤维素水解产物木糖的发酵菌种选育是一个世界性难题,针对这个难题,本文克隆了木糖代谢途径中的五个关键酶基因,并对转醛酶进行了活性表达。具体内容如下:1)以耐酒精高活性干酵母为原始出发菌株做60Co-γ辐射处理,经多级筛选获得诱变优势菌株H12、H13、H15,再经甜高粱秸秆固态发酵实验,确定H13为最佳诱变菌株。2)研究了最佳诱变菌株H13对甜高粱秸秆固态发酵工艺,得到的最适工艺条件是:粉碎后的甜高粱秸秆300g,5‰的菌体接种量、68%的基质含水量、36℃条件下发酵60h;经测定,乙醇产率达6.4g/100g鲜秸秆,发酵后基质的还原糖含量为0.31%。3)利用发酵后的甜高粱秸秆为原料,采用不同的霉菌分别与酵母H13组合进行发酵,从而确定康宁木霉与酵母H13的组合为最佳发酵菌种组合,并对其发酵条件进行优化。结果表明:每份150g秸秆发酵培养基中辅以15%豆饼粉、2%硫酸铵,含水量为60%,以12%的接种量接入混合菌液(1:1的混合比例),32℃培养4d,可使发酵饲料中的粗蛋白含量由16.5%提高到21.7%,提高率为31.5%,粗纤维由15.8%降低到12.5%,降幅为20.9%。4)从树干毕赤酵母和酿酒酵母中提取总RNA,通过RT-PCR克隆得到XYL1、XYL2、XKS1、TAL1、TKL1,分别与pGM-T载体连接,转化感受态DH5α,获得转化重组子,测序结果显示,克隆得到的五个基因序列与基因库中所公布的序列同源性达99%以上,其中TAL1的序列同源性为99.90%,氨基酸同源性为100%。5)构建pAUR123-TAL1重组质粒,经测序,其序列与pGM-TAL1的序列完全一致。通过电击转化酿酒酵母,并实现了TAL1在酿酒酵母中的活性表达。
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