乳腺癌细胞增殖与凋亡相关microRNA的筛选

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肿瘤是难以治愈的疾病。目前对肿瘤的治疗主要是通过外科手术切除,以及放疗或化疗等方法,但目前尚无法根治。乳腺癌是一种女性常见的肿瘤,在恶性肿瘤女性患者中,乳腺癌的发病率高居第一。目前已有越来越多的研究发现癌基因在乳腺癌的发生、发展中起着非常重要的作用,它们可能调控着癌细胞的增殖、迁移或凋亡。微小RNA(microRNA)是一类单链小分子非编码RNA,长度约22个核苷酸,广泛存在于真核生物中,主要通过与靶mRNA3’非翻译区完全或部分互补结合,导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制,从而调控靶基因的表达。鉴定能够对乳腺癌关键癌基因起调控作用的microRNA,对乳腺癌的治疗有着重要的作用。本研究以人乳腺癌细胞系MCF-7为研究系统,利用慢病毒(lentivirus)介导的真核细胞表达系统过表达特定miRNA,检测对MCF-7细胞系的增殖具有抑制作用的microRNA。实验主要分为4个部分:1.在miRanda、miRDB、PicTar和TargetScan4个microRNA靶基因预测软件上分别进行了靶预测,选择靶基因中富集了参与调控细胞增殖和细胞生长的miRNA。最后找到miR-124、miR-181a-1、miR-211、miR-302a、miR-302b、 miR-302c及miR-367这7个microRNA作为候选microRNA。2.根据miRBase数据库中的人microRNA前体序列,合成互补的两条序列片段,将两条链退火后,酶联到pLVX-shRNA2慢病毒表达载体上。3.利用磷酸钙法,在293T细胞中包装病毒,将包装好的病毒感染人乳腺癌细胞系MCF-7。4.感染病毒后,通过CCK8法检测特定miRNA表达对MCF-7的抑制作用,并结合细胞增殖相关的基因的表达情况,以确定miRNA对细胞增殖的影响及其作用机制。
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