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目的:
本实验通过以SST干预HIBD大鼠后血液中D-乳酸、小肠绒毛的病理变化及回肠组织中P物质(SP)的改变,探讨SST对HIE肠损伤的治疗作用,以期为临床治疗新生儿HIE肠损伤的有效方法和途径提供理论依据。
方法:
1.动物模型的制备将7日龄SD大鼠仰卧固定于操作板上,常规消毒切开颈部皮肤分离并结扎左颈总动脉,缝合切口,后置于37℃恒温水浴2.5L的密闭玻璃容器中(保持玻璃容器内温度约为34℃),以1.5~2.5L/min的速度通入湿化混合气体(体积浓度8%氧气:92%氮气),2h后恢复正常供氧。假手术组仅切开颈部皮肤,分离左颈总动脉后不予结扎,缝合切口后不做低氧处理。空白组不予任何处理。
2.腹腔注射方法造模成功后约10分钟直接抽取用生理盐水稀释为1ug/ml的SST溶液。左手抓住动物,右手将注射针头于左或右下腹刺入皮下,针头向前推0.5到1.0cm,再以45°角穿过腹肌,固定后,缓慢注射溶液,按20ug/kg计量给药。
3.行为能力检查:分别于手术前及缺氧后对每只新生大白鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。
4.脑大体及回肠形态检查:分别于处死时观察每只新生大鼠脑组织和回肠组织的大体形态。
5.血液中D-乳酸浓度,小肠绒毛高度及宽度的变化和回肠组织中SP测定:将7日龄SD大白鼠按照完全随机法分成空白组(n=6),sham术组(n=6),HIE模型组(n=8),SST治疗组(n=8)。给予处理6小时后,各组新生大白鼠经腹主动脉取血测量血浆D-乳酸,截取回肠组织经IBA2000图象分析系统测量小肠绒毛高度宽度并给予病理摄像,对回肠组织中的P物质(substanceP,SP)进行免疫组织染色以测量其浓度变化。
结果:
1.行为能力检查术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定,28只全部正常。sham组测定结果同前。经历缺氧缺血的16只大鼠,9只不能翻身,2只出现夹尾左旋,3只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。
2.肠组织大体检查新生大白鼠HIE后6小时回肠组织的肉眼外观与空白组比较可见明显苍白,水肿,而且体积增大,SST干预的治疗组大白鼠未见上述改变或仅见轻微的水肿,假手术组和空白组大鼠未见任何病理变化。
3.脑大体检查新生大白鼠HIBD后模型组的结扎侧半球脑组织受损严重,在6h时即可出现明显的苍白、水肿,体积明显大于对侧,其中1例可看到结扎侧大脑半球局部出现液化坏死灶;而SST干预组的大白鼠脑组织未见上述改变或仅见结扎侧脑半球轻微的水肿;假手术组和空白组大鼠大脑半球左右对称,未见任何病理变化。
4.血液中D-乳酸浓度,小肠绒毛高度及宽度的变化和回肠组织中SP测定:模型组血浆D-乳酸水平显著升高,回肠部分的小肠绒毛变粗变短,部分发生融合,数目减少,黏膜层及神经纤维丛中的SP免疫组织化学染色阳性表达明显增强,即平均光密度增高。与模型组相比较,SST治疗组的血浆D-乳酸水平显著下降,回肠段的小肠绒毛变细变高,数目显著增加,黏膜层及神经纤维丛中SP免疫组织化学染色表达显著减弱。
结论:
1.新生大鼠HIBD模型制作成功。
2.7日龄新生大白鼠HIBD后,不但行为能力出现异常,6小时后肠道组织肉眼观出现明显的苍白水肿,体积增大。光镜下,病理学观察,可见回肠上皮细胞出现脱落坏死,且小肠绒毛数量减少,出现融合,绒毛变高变粗,血液中D-乳酸水平显著升高,证明肠黏膜的屏障功能受损。肠黏膜层及神经纤维丛SP增多,提示HIBD肠道损伤与炎症反应有关。
3.治疗组治疗组血浆D-乳酸水平下降,绒毛变细变高,数目增多,黏膜及神经纤维丛SP表达减弱。SST可通过参与炎症反应的免疫抑制调节,抑制肥大细胞释放炎性介质,提高黏膜内自由基清除酶活性,防止细胞膜的脂质过氧化损伤,对肠黏膜屏障起保护和治疗作用。为临床HIE后的肠道损伤的治疗提供了理论依据,同时也为SST在临床上的应用打开了一扇崭新的窗口。