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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）是一种存在于猪上呼吸道的条件性致病菌,有15种血清型,其中1、5、12、13和15型毒力较强,且各血清型之间交叉免疫保护现象较差,血清型5、12和13在中国流行较广,造成了养猪业巨大的经济损失。猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）主要在肺泡巨噬细胞（PAM）和其它一些单核细胞系中复制,宿主免疫力下降易继发性感染猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CFSV）、猪链球菌、HPS、猪肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌和沙门氏菌等病原,使患病猪的临床症状加重,死亡率增加。PRRSV感染后继发性感染HPS的现象在临床上非常普遍,但关于PRRSV与HPS共感染的相关研究较少。本课题从疑似HPS感染的发病猪的心包液和关节液中分离出一株细菌,经测序及血清分型后确定为13型HPS;研究了13型HPS的培养条件及生长曲线,不同剂量的13型HPS感染仔猪的动物模型和PRRSV与HPS共感染对仔猪致病性的影响。主要内容及结果如下:（1）13型HPS的分离及培养特性的研究:从临床上分离出一株细菌,经16S rRNA基因组及PCR分型鉴定为13型HPS。通过优化HPS生长所必须的血清和影响因子的浓度,发现此菌在TSB中最佳的培养条件为5%新生牛血清和10μg/mL烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）。然后,绘制了生长曲线,确定OD600值从0.2到0.6为此菌的对数生长期,增殖过程中产生了大量的酸。（2）13型HPS感染仔猪的动物模型的建立:首先建立了能够定量检测HPS含量的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR的方法,检测其特异性、敏感性和重复性;然后建立了HPS感染动物的模型,观察临床症状,测量体温变化,检测鼻拭子、血液和肺组织样本中病原的滴度;发现用滴鼻的接种方式感染HPS,感染剂量为2 mL（1×106 CFU/mL）HPS,此时的试验组仔猪有明显的临床症状。（3）PRRSV和HPS共感染对猪致病性的影响:按照上述HPS的感染剂量和方式建立PRRSV和HPS的共感染模型。然后观察各组食欲、呼吸、咳嗽、流鼻涕和腹泻等临床症状。根据临床记录临床评分。检测所采集的血液、鼻拭子和内脏组织等样本中所含病毒和细菌的载量。在感染的第10天时,每组3头仔猪安乐死,观察各内脏组织病理损伤层度。最后检测了肺组织和血清中炎性因子（TNF-ɑ,IL-1β,IL-6和IL-8）的mRNA水平及浓度的变化。各试验组即PRRSV-infection组（PRRSV单独感染组）,HPS-infection组（HPS单独感染组）和HPS-PRRSV组（PRRSV与HPS共感染组）的仔猪体温均高于对照组。在PRRSV感染后的第3到第14天HPS-PRRSV组的平均体温明显高于其它单独感染组。临床评分结果显示,试验组均有相应的临床症状出现,HPS-PRRSV组的临床症状相较于其它单独感染组尤为明显（P<0.05）。解剖及病理学发现,共感染组的仔猪内脏组织（心、肝、脾、肺、肾、淋巴结）出现更为严重的病理变化。由以上结果得出HPS与PRRSV共感染可以产生更为严重的临床症状。PRRSV感染后的一段时间内,共感染组的血液、鼻拭子和肺组织样本中HPS和PRRSV的滴度明显高于单独感染组（P<0.05）。血清中HPS及PRRSV的特异性抗体水平显示,从共感染后的第6天开始HPS-PRRSV组的HPS和PRRSV的抗体水平明显高于单独感染组（P<0.05）。由以上结果得出,PRRSV可以促进HPS在肺组织及血液中的增殖,而HPS对PRRSV的致病性有一定的影响。肺组织中炎性因子的（TNF-ɑ,IL-1β,IL-6和IL-8）mRNA结果显示,HPS-PRRSV组炎性因子（TNF-ɑ,IL-1β,IL-6和IL-8）的mRNA的水平明显高于单独感染组（P<0.05）。HPS-PRRSV组血清中炎性因子（TNF-ɑ,IL-1β和IL-8）的浓度与单独感染组相比有明显的差异性（P<0.05）。由结果得出HPS与PRRSV共感染可以促进机体内部分炎性因子的分泌和表达。综上所述,本研究通过对13型HPS的培养条件的优化及生长曲线的绘制,确定了收获此菌的最佳OD600值的范围;将所收获的细菌感染仔猪后,发现W2-106组的临床症状最为明显;通过成功构建的PRRSV与HPS共感染的动物模型得出:PRRSV能够促进HPS在猪体内的增殖,HPS对PRRSV的致病性有促进作用,而PRRSV与HPS共感染能够促进机体内部分炎性因子的分泌和表达。