细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)是一类含铁血红素和硫羟基的单加氧酶蛋白超家族,能在温和条件下把底物中惰性的碳氢键氧化,从而使底物发生氧化。CYP450广泛地分布在动物、植物、低等真核生物和细菌的体内,以及同种生物的不同组织中,是自然界中含量最丰富、底物谱最广的催化酶系。　　Rhodococcus sp R04是从华北油田污染土壤中筛选出的一种嗜吡啶红球菌,该菌可以降解多种芳香族化合物。通过基因组测序发现,Rhodococcus sp R04中含有15种 CYP450单加氧酶,其中,与甾醇类代谢相关的 CYP125单加氧酶有两个CYP125A18和CYP125B2,经研究表明它们与Rhodococcus sp RHA1和Mtb中的CYP125属于同一族群,主要功能是催化4-胆甾烯-3-酮的27位碳原子羟基化,参与胆固醇的分解代谢。　　本研究通过对R04中与胆固醇及其类似物代谢相关的两种CYP125A18和B2进行分子克隆、体外异源表达、蛋白的分离纯化等。随后,利用荧光分析法初步对其性质研究,包括两种CYP125以胆固醇及其类似物为底物结合进行研究,结果表明谷甾醇与CYP125结合后引起的变化量最大,胆固醇次之,4-胆甾烯-3酮较弱,胆固醇乙酸酯最弱。并且发现随温度的升高荧光结合光谱会随之减弱、pH值的变化(特别在弱酸弱碱时)也会对其荧光光谱的最大吸收产生一定的影响。　　通过荧光分析法,本课题研究了CYP125A18和CYP125B2与不同浓度唑类药物的相互作用,结果表明随着唑类药物浓度的增大荧光强度也逐渐增高的结论。同时还研究了不同温度下一定浓度唑类药物与CYP125A18和CYP125B2的相互作用,表明随着温度的升高,大多数其相互作用的荧光强度呈逐渐减弱的趋势。以及,在以胆固醇及其类似物为底物存在时,不同唑类药物对CYP125蛋白结合的相互竞争作用,表明当唑类药物浓度逐渐增大时,对底物的竞争作用因唑类药物的种类不同而存在一定差异。本课题的一系列研究,旨在为今后CYP125催化胆固醇及其类似物代谢的实际应用,以及与唑类药物的相互作用研究提供一些理论基础。