苹果多酚(Apple polyphenols，AP)由于具有抗氧化、抗衰老、抗过敏和抗癌等多种药理作用，在食品、医药等领域得到广泛应用。据报道苹果多酚对结肠癌、乳腺癌、胃腺癌和前列腺癌等人体多种肿瘤有显著抗癌作用，而对正常细胞无毒副作用，是一类极具开发前景的天然抗癌物质。鉴于腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma，ACC)目前的治疗方法以扩大切除手术为主，但术后复发、转移仍难以控制，因此人们越来越重视术后辅助治疗。目前常用的化疗药物毒性强，不良反应大，杀伤肿瘤细胞的同时，还会杀伤一定数量的正常增殖细胞。本研究采用苹果多酚对ACC—M细胞进行干预，观察苹果多酚对ACC—M细胞的体外增殖及对VEGFR2、Caspase—3基因表达的影响，以阐明苹果多酚的作用机制，为临床治疗腺样囊性癌提供一种新思路。 第一部分苹果多酚对ACC—M细胞增殖的影响 目的：探讨苹果多酚对ACC—M细胞体外增殖的影响。 方法：建立ACC—M细胞生长曲线，台盼蓝排斥试验检测其活力；MTT法检测苹果多酚对ACC—M细胞毒作用和最佳作用浓度范围；倒置显微镜观察苹果多酚对ACC—M细胞形态学的改变；流式细胞术研究苹果多酚对ACC—M细胞周期和凋亡的影响。 结果：当ACC—M细胞传代培养到第3、4天，达80％融合度时，细胞活力最强，活细胞率>98％，此时细胞适合消化传代或研究；苹果多酚对ACC—M细胞增殖的抑制效应随着时间和浓度的增加而增强，具有时间，浓度依赖效应；在100～250μg/ml浓度下作用48h，对ACC—M细胞有显著的抑制作用，而对NIH3T3细胞几乎无毒性作用，是研究苹果多酚抑制ACC—M细胞增殖的最佳浓度；苹果多酚作用下，ACC—M细胞开始变得细长，核浆比例变小，接着细胞皱缩，变圆，可见分裂相减少，然后核固缩碎裂，出现凋亡小体，细胞漂浮，并且细胞形态改变程度随着苹果多酚浓度增加而增强；流式细胞术PI染色法显示：实验组G0/G1期细胞构成比高于对照组，S期和G2/M期细胞构成比及细胞增殖指数均低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；FITC—annexin V/PI染色法显示：对照组细胞活力良好，实验组出现有凋亡和死亡细胞，随着浓度的增高凋亡和死亡细胞数量增多，但不同浓度的实验组均为凋亡细胞多于死亡细胞。 结论：苹果多酚可在体外抑制ACC—M细胞增殖，同时诱导ACC—M细胞凋亡，可能对腺样囊性癌具有抗癌作用。 第二部分苹果多酚对ACC—M细胞VEGFR2、caspase—3表达的影响 目的：通过检测苹果多酚作用下ACC—M细胞VEGFR2、Caspase—3基因表达的变化，探讨苹果多酚抑制ACC—M细胞增殖机制。 方法：分别用0、150、250μg/ml苹果多酚与ACC—M细胞共培养48h后，RT—PCR和Western—blot检测苹果多酚对ACC—M细胞VEGFR2、Caspase—3mRNA和蛋白表达的影响。 结果：随着苹果多酚浓度的增加，ACC—M细胞VEGFR2 mRNA表达减弱，而ACC—M细胞Caspase—3 mRNA表达增强，差异均具有统计学意义(P<0.05)；Western—blot显示：ACC—M细胞VEGFR2蛋白表达量减弱，而ACC—M细胞Caspase—3蛋白表达增强，差异均具有统计学意义(P<0.05)。 结论：苹果多酚对ACC—M细胞增殖的抑制作用的机制之一可能是通过抑制VEGFR2基因的表达，同时通过激活Caspase—3介导的信号转导通路实现苹果多酚诱导ACC—M细胞的凋亡。