第一部分不同剂量重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗强直性脊柱炎疗效比较目的：（1）评价并比较不同剂量的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子（TNF）受体-抗体融合蛋白（rhTNFR-Fc）短期治疗强直性脊柱炎（AS）的临床疗效；（2）探讨rhTNFR-FC短期治疗AS达到临床疗效的最适给药方法。方法：（1）本研究为一项开放性随机临床试验。将20例确诊的活动期AS患者随机分配至A、B两组，每组各有10名受试者。A组皮下注射rhTNFR-Fc 25mg，2次/周，连续给药8次。B组皮下注射rhTNFR-Fc 50mg，1次/周，连续给药8次。A、B两组同时进行，每位患者只接受一组治疗。在给药0、1、4、8次、停药后20d进行临床评估，在给药0、4、8次后进行实验室评估。（2）疗效评价指标：主要疗效评价指标为ASAS20；次要疗效评价指标为ASAS50，BASDAI50；不同时间点与基线相比夜间背痛、总体背痛、患者对目前疾病状况的总体评分（PGA）、Bath AS功能指数（BASFI）、Bath AS疾病活动指数（BASDAI）变化的情况。实验室指标：血小板（PLT）、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）。（3）计量指标采用均数±标准差（（?）±s）描述，计数指标采用例数及百分数描述。计量资料的比较采用配对t检验/Wilcoxon符号秩和检验，计数资料的比较采用X²检验。以P＜0.05作为具有统计学显著性意义的界限。全部过程均通过CHISS统计分析软件进行。结果：两组在第1、4、8次给药及停药后20d ASAS20、ASAS50、BASDAI50差异无显著性（P＞0.05）；在总剂量相同（200mg）但是不同用药间隔情况下，25mg组患者与50mg组相比，达到ASAS20、ASAS50、BASDAI50改善的例数差异也无统计学意义，但是50mg组较早获得BASFI改善（P=0.0289）。其他指标在不同时间点均无显著性差异。结论：（1）不同剂量rhTNFR-Fc、不同间隔时间治疗我国AS患者时疗效无差异；（2） 50mg，1次/周的方法会给患者带来较早的功能方面（BASFI）的改善；（3） 50mg、每周1次给药更方便、经济。第二部分rhTNFR-Fc治疗前后强直性脊柱炎患者T细胞活性变化的试验研究目的：探讨rhTNFR-Fc治疗对AS患者外周血T细胞的功能（细胞因子的分泌和CD4⁺T细胞增殖功能）的影响。方法：（1）于基线、第1、4次给药和停药（第8次给药）后20d收集第一部分rhTNFR-Fc开放性随机对照临床试验的10例AS患者（50mg，1次/周组）和13名健康对照外周血，用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测rhTNFR-Fc治疗前后AS患者及健康对照外周血分泌TNF-α、IL-2、IL-6和IFN-γ的T细胞数变化情况。并与BASDAI（及其各子项目）、BASFI、PGA、夜间痛、总体背痛、ESR、CRP、PLT等临床指标进行相关性分析。并用Logistic分析基线时分泌TNF-α、IL-2、IL-6和IFN-γ的T细胞数是否是疗效影响因素。（2）于基线、第1、4次给药后收集患者和健康对照外周血，使用WST-1活细胞染色法检测治疗前后CD4⁺T增殖率。并与临床指标进行相关性分析。结果：1．ELISPOT结果：（1） TNF-α：基线时显著高于对照组（P=0.0353）。用药后呈降低→升高→再降低的趋势，分别与基线时相比，到停药后20d降低达到统计学意义（P=0.0212）。变化率在用药后均为负值。（2） IL-6：基线时显著高于对照组（P=0.0015）。用药后呈降低→升高→再降低的趋势，分别与基线时相比，到停药后20d降低达到统计学意义（P=0.0253）。变化率在用药后均为负值。（3） IL-2：基线、第1、4次用药以及停药后20d明显高于对照组（P值分别等于0.0004、0.0371、0.0221、0.0027）。用药后呈降低→升高→再降低的趋势，分别与基线时相比，均无统计学意义。变化率在第1次给药及停药后20d均为负值，第4次给药后明显上调，并超越基线时水平。（4） IFN-γ：基线时以及停药后20d和正常对照相比较，明显高于对照组（P值分别为0.0016和0.0483）。用药后呈降低→持续升高的趋势，分别与基线时相比，只在第1次给药后有明显减少（P=0.0497）。变化率均为负值，但是随着用药次数的增加上升。（5）与临床指标的相关性：分泌IL-2、IFN-γ的细胞数在各时间点与临床指标均无相关性。基线时分泌IL-6的细胞数与BASFI有显著的相关性；在给药第4次后，分泌TNF-α的细胞数与BASDAI-E有相关性，分泌IL-6的细胞数与BASDAI、夜间痛、总体背痛、BASDAI-E有显著相关性。2．CD4⁺T细胞增殖率的结果：（1）基线和第4次给药时与对照组相比差异有显著性（P值分别为0.0034和0.0494）；与基线时相比，差异均无统计学意义。（2） CD4⁺T细胞增殖率的变化率在第1、第4次给药后均为负值，与第1次给药相比第4次给药后有所上升。（3）各时间点临床指标与CD4⁺T细胞增殖率均无相关性。3．评价终点时（停药后20d）所测细胞因子下降水平与临床指标改善百分率的分析在rhTNFR-Fc治疗后细胞因子下降的同时看到了临床指标的改善，BASDAI、BASFI、PGA、夜间痛、总体背痛、ESR、CRP、PLT分别下降了63.8％、50％、56.7％、70％、97.9％、72.4％、66.9％、25.3％。4．基线时分泌TNF-α、IL-6、IL-2，IFN-γ的细胞数量不能作为ASAS50疗效影响因素。结论：（1） AS患者存在TNF-α、IL-6、IL-2、IFN-γ分泌功能的上调；（2） rhTNFR-Fc治疗降低了AS患者T细胞分泌细胞因子的功能；（3） rhTNFR-Fc治疗降低了AS患者CD4⁺T细胞增殖能力；（4）分泌IL-6的细胞数与AS临床评价指标有一定相关性。第三部分rhTNFR-Fc治疗前后AS患者外周血CD4⁺CD25⁺T调节细胞及髓系树突状细胞变化的试验研究目的：（1）探讨CD4⁺CD25⁺T调节细胞（regulatory T cell，Treg）和髓系树突状细胞（myeloid dendritic cells，mDC）在AS患者发病机制中的作用；（2）通过Treg和DC在抗TNF-α治疗前后的变化，了解抗TNF-α制剂治疗AS的免疫学机制；（3）探讨Treg和DC对AS病情变化的评估作用；（4）进一步探讨在AS中Treg、DC和TNF-α相互作用的机制。方法：于第0周、2周和6周收集rhTNFR-Fc随机双盲、安慰剂平行对照临床试验的36例rhTNFR-Fc组和安慰剂组的AS患者以及19名健康对照的外周血，使用三色荧光流式细胞术检测rhTNFR-Fc治疗前后其外周血Treg、DC的变化情况。并与疾病活动性评价指标（BASDAI）、功能指标（BASFI）和炎性指标（ESR、CRP、PLT）进行相关性分析。并用Logistic分析基线时MHC-ⅡDC是否是可以作为疗效影响因素。结果：AS患者外周血中CD4⁺T细胞、CD4⁺CD25^high调节性T细胞比率与正常对照组差异无显著性（P＞0.05），CD4⁺CD25⁺调节性T细胞比率低于正常对照组（P=0.0013），但与临床指标无相关性。试验组及安慰剂组CD4⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺T细胞及CD4⁺CD25^highT细胞水平在治疗前后比较均无显著性差异（P值均＞0.05）。MHC-ⅠDC细胞水平与正常对照组比较差异无显著性（P＞0.05），MHC-ⅡDC细胞水平显著低于正常对照组（P=0.0083）。试验组及安慰剂组MHC-ⅠDC细胞水平在治疗前后均无显著性差异（P值均＞0.05）；安慰剂组MHC-ⅡDC细胞水平在治疗前后无显著性差异（P＞0.05）；试验组MHC-ⅡDC细胞水平在治疗后2周、6周分别与0周相比，均有显著升高（P值均＜0.05），6周与2周相比差异无显著性（P=0.1336）。试验组AS患者MHC-ⅡDC细胞水平与BASFI、BASDAI、CRP、ESR、PLT进行相关性分析，在0周、2周、6周时都未显示出明显的相关性。基线时MHC-ⅡDC细胞水平不能作为ASAS20疗效影响因素。结论：（1） CD4⁺CD25⁺Treg的减少可能参与了AS的发病；（2） MHC-ⅡDC随着rhTNFR-Fc治疗有显著升高。