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研究背景原发性肝癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,其高发病率及高死亡率大大增加社会经济负担。2018年全球肿瘤流行病学数据表明:每年有超过84.1万例新发肝癌患者,78.2万例患者死于肝癌[1]。因此,积极探索肝癌发生发展过程中分子水平变化及细胞信号转导通路的机制机理,为肝癌患者的早期诊断及治疗靶点提供重要线索,对进一步改善肝癌患者预后具有重要指导性的作用。mRNA转录后功能受多种生物学过程调节,在真核生物基因的表达中具有重要意义。其中,RNA结合蛋白（RNA-binding proteins,RBPs）在mRNA转录后调节过程中意义重大[2,3]。RBPs异常表达直接导致RNA结构和功能改变。在已发现的500多种RBPs中有部分被证实与肿瘤的发生发展有关,这为肝癌的靶向治疗提供新的研究思路[4-6]。hMex-3作为进化上较为保守的RNA结合蛋白家族（hMex-3A至3D）,具有两个同源（K-homology,KH）RNA结合结构域（RBD）[7]。hMex-3A作为RNA结合蛋白家族hMex-3中的一员,与hMex-3B组成P小体,发挥降解mRNA、抑制mRNA翻译等生物学作用。大量研究证实hMex-3A在膀胱癌、胃癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中表达升高,与肿瘤的发生发展有重要关系[8-11]。因此,我们推测hMex-3A在肝癌发生发展中可能发挥重要的调节作用。为此,我们进一步通过TCGA数据库挖掘分析,并进行肝癌组织中hMex-3A的表达验证;同时在体外水平进一步探讨其对肝癌细胞的生物学功能的影响,为肝癌的早期诊断及治疗提供新的策略。目的1.利用生物信息学技术分析hMex-3A在肝癌中的表达情况及与肝癌患者预后的关系,并分析其临床意义。2.观察hMex-3A在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况,初步探讨hMex-3A在肝癌的潜在临床价值。3.通过体外实验探究hMex-3A对肝癌细胞恶性生物学功能的影响,为进一步探讨肝癌的发生机制提供理论依据。方法1利用生物信息学技术通过TCGA数据库分析hMex-3A在肝癌中表达情况,进而分析hMex-3A表达水平与临床病理参数及肝癌患者生存预后的关系。2.采用12对肝癌患者的癌组织及配对癌旁组织,qRT-PCR检测肝癌组织和癌旁组织中hMex-3A mRNA的表达情况;同时收集6对肝癌组织及配对癌旁组织,蛋白印迹法检测肝癌组织中hMex-3A蛋白表达情况。3.釆用免疫组织化学法（immunohistochemical,IHC）对含有93例肝癌样本的组织芯片进行染色分析,探讨hMex-3A的表达水平与肝癌患者生存预后的关系。4.通过转染hMex-3A干扰RNA,敲低肝癌细胞中hMex-3A的表达,通过细胞功能学实验,如CCK-8实验、平板克隆实验、划痕实验及Transwell实验探索hMex-3A对肝癌细胞恶性生物学功能的影响。结果1.hMex-3A在肝癌组织中表达上调,并与肝癌患者临床预后相关肝癌组织中hMex-3A水平较癌旁组织表达升高（P=0.0044）,TNM分期中III&IV期的肝癌患者的hMex-3A表达水平要高于I&II期的肝癌患者（P=0.0308）,病理分级中III&IV级的肝癌患者的hMex-3A表达水平要高于I&II级的肝癌患者（P=0.0234）。单因素分析提示hMex-3A高表达水平（P<0.001）、肿瘤大小（P=0.021）、TNM分级（P<0.001）与患者的生存预后相关。COX多因素分析结果提示hMex-3A高表达水平（HR=1.491,P=0.009）及TNM分期（HR=2.298,P=0.024）是肝癌患者临床预后的独立危险因素。Kaplan-Meier分析提示hMex-3A高表达的肝癌患者总生存率低于hMex-3A低表达肝癌患者（P=0.0041）。2.hMex-3A影响肝癌细胞恶性生物学功能通过验证发现肝癌细胞系中Hep3B和SK-Hep-1的hMex-3A表达水平高于其他肝癌细胞株。与对照组相比,敲低肝癌细胞Hep3B和SK-Hep-1中hMex-3A的表达可以显著抑制细胞增殖能力和克隆能力;划痕实验及Transwell实验显示,下调肝癌细胞中hMex-3A表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。结论1.hMex-3A mRNA和蛋白水平在肝癌组织和肝癌细胞中表达均上调,与肝癌的发生发展有关。2.肝癌组织中hMex-3A的高表达是肝癌患者生存预后的独立危险因素,可作为预后预测指标。3.敲低hMex-3A可显著抑制肝癌细胞的增殖、克隆能力、迁移、侵移等生物学功能,具有作为治疗靶点的潜在价值。