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Notch是一种进化上十分保守的跨膜受体蛋白家族,能调节细胞的增殖、分化、凋亡等各个环节,在胚胎植入发育和血管形成重建等各方面都发挥重要作用;米非司酮作为临床广泛使用的终止早孕药物,其抗早孕机制是否和Notch信号转导通路有关,目前尚不了解。本课题运用RT-qPCR、免疫组织化学的方法检测服用不同剂量米非司酮后,早孕绒毛组织中Notch信号转导通路中相关分子的表达变化,从而了解米非司酮作为抗早孕药物,对Notch信号转导通路的影响。课题分为两部分:(1)米非司酮对早孕绒毛组织中Notch-1基因在mRNA和蛋白水平表达的影响;(2)米非司酮对早孕绒毛组织中Notch下游基因Snail、E-Cadherin在mRNA和蛋白水平表达的影响以及对Notch配体Dll-4基因在mRNA水平表达的影响。第一部分米非司酮对早孕绒毛组织中Notch-1基因表达的影响目的:探讨100mg、150mg、200mg三种不同剂量的米非司酮在mRNA和蛋白水平对早孕绒毛组织中Notch-1基因表达的影响。方法:要求终止妊娠的正常早孕妇女80例分四组,组1为对照组,组2～4术前分别服用米非司酮100mg、150mg、200mg,每组各20例。运用RT-qPCR方法检测四组行人工流产后早孕绒毛组织中Notch-1 mRNA的表达;采用免疫组织化学方法检测早孕绒毛组织Notch-1蛋白的定位及半定量表达情况,与对照组进行比较。结果:不同剂量的米非司酮对Notch-1基因mRNA及蛋白表达的影响,以200mg组作用最为显著,与其他各剂量组比较差别有显著意义(P＜0.05),100mg组表达有改变,但与对照组比较差别无统计学意义(P＞0.05);150mg组和对照组比较,mRNA水平差别有统计学意义(P＜0.05),蛋白水平差别无统计学意义(P＞0.05);150mg和100mg两组之间差别无统计学意义(P＞0.05)。Notch-1蛋白以滋养细胞胞浆表达为主,间质少量表达。结论:早孕绒毛组织中存在Notch-1基因的表达,应用米非司酮后其表达呈升高趋势,200mg组作用最为显著(P＜0.05)。提示米非司酮可能通过调控绒毛组织中Notch信号转导通路,参与抗早孕的作用机理。第二部分米非司酮对早孕绒毛组织中Notch配体及下游基因表达的影响目的:探讨100mg、150mg、200mg三种不同剂量的米非司酮在mRNA和蛋白水平对早孕绒毛组织Notch信号转导通路下游基因Snail、E-Cadherin表达的影响以及对Notch配体Dll-4 mRNA水平表达的影响。方法:病例与分组同第一部分。运用RT-qPCR方法测定行人工流产后早孕绒毛组织中Snail、E-Cadherin、Dll-4 ERNA的表达;采用免疫组织化学方法检测早孕绒毛组织Snail、E-Cadherin蛋白的定位及半定量表达情况,与对照组进行比较。结果:(1)对Snail基因表达的影响,mRNA水平与Notch基因一致,200mg剂量组表达明显,和其他组比较差别有显著意义(P＜0.05)。150mg、100mg组有变化,差别无统计学意义(P＞0.05);蛋白水平:200mg与150mg组与对照组比较明显上升(P＜0.05)。100mg组表达略有上升,差别无统计学差异(P＞0.05);Snail蛋白的表达以滋养细胞胞核表达为主,间质少量表达。(2)米非司酮对E-Cadherin基因表达的影响,在mRNA水平各剂量组比较无明显差别(P＞0.05);在蛋白水平200mg组米非司酮明显降低E-Cadherin的表达(P＜0.05);150mg组和100mg组不同程度降低E-Cadherin蛋白的表达,但差别无统计学意义(P＞0.05);E-Cadherin蛋白表达以滋养细胞胞膜为主,间质细胞少量表达。(3)对Dll-4基因mRNA水平表达的影响:各剂量米非司酮作用后,早孕绒毛组织中Dll-4mRNA的表达略有变化,差别无统计学意义(P＞0.05)。结论:早孕绒毛组织中存在Snail、E-Cadherin、Dll—4基因的表达,应用米非司酮后,Snail基因表达上升,E-Cadhein在蛋白水平表达下降,均以200mg组作用最为显著(P＜0.05);Dll—4mRNA各组变化无统计学差异(P＞0.05);提示米非司酮可能通过Notch/Snail/E-Cadherin信号转导通路,调控滋养细胞的生物学行为,参与抗早孕的作用机理。