四叶参(Codonopsis lanceolata Benth.et Hook.f.)是一种民间的常用草药,大量中药古籍记载四叶参的确是具有下乳通经、治疗产后缺乳的功效。多糖作为其中最主要的生物活性之一,被广泛进行研究。而大量临床数据表明肥胖降低了女性的母乳喂养成功率和哺乳期的母乳质量。但是,所涉及的机制和更好的预防性治疗方案尚未完全了解。基于此,本论文以四叶参总多糖(PCL)为实验材料,主要研究PCL通过干预青春期6周、成熟期10周、怀孕7-9天、怀孕12-14天、泌乳第1天和泌乳第7天共六个时期来抑制由于高脂饮食诱发产生的导管发育缓慢、乳腺细胞增殖分化减弱、产后缺乳和乳汁成分质量下降的病状。论文获得的实验结果主要有:(1)长时间的高脂饮食的确会影响小鼠乳腺导管生长,包括乳腺脂肪垫的过多堆积,以及乳腺导管的分布不均匀和发育受限的情况。通过全组织胭脂红染色的实验结果表明PCL可以显著改善由于高脂饮食造成的小鼠乳腺导管密度下降、分支变少和分布不均匀的病状。另外HE染色结果更进一步表明了PCL可以改善由于高脂饮食造成的小鼠乳腺导管上皮层厚度减少的现象。这些结果均表明PCL可以显著改善由于高脂饮食造成的乳腺导管密度下降、分布不均匀以及发育受限的情况。(2)PCL可以改善由于高脂饮食诱导造成的小鼠乳腺导管上皮细胞增殖分化减弱的症状,从而达到促进小鼠乳腺发育的作用。通过α-SMA、KI67免疫组化的实验结果表明PCL可以提高模型组小鼠乳腺肌上皮细胞和腔管内皮细胞线性包裹的完整性以及乳腺细胞的增殖程度。流式实验结果表明对比低脂组小鼠乳腺,高脂饮食会造成乳腺基底细胞和腔管细胞比例发生异常变化,并且出现腔管祖细胞增多的现象。但是PCL可以明显改善乳腺基底细胞和腔管细胞比例,并且降低腔管祖细胞数量进而达到促进腔管细胞发育成熟的作用。同时β-casein免疫组化结果进一步证明模型组腔管细胞在泌乳前期出现分化延迟以及泌乳后期出现分化程度偏低的现象,而PCL可以明显提高腔管细胞在泌乳前期和泌乳后期的分化程度。这些结果均表明PCL可以显著改善由于高脂饮食造成的导管上皮细胞增殖分化减弱的症状,同时促进腔管细胞的分化成熟,进而达到促进小鼠乳腺发育完成泌乳的过程。(3)PCL可以改善由于高脂饮食诱导造成的产后泌乳量降低、乳汁成分质量下降和后代仔鼠生长缓慢且存活率低的现象。通过统计泌乳量多少、产后仔鼠体重变化以及仔鼠存活率,发现高脂饮食诱导的小鼠产后泌乳量明显低于低脂组和加糖干预组,并且模型组仔鼠体重也远低于低脂组和加糖干预组,同时还造成后代仔鼠一定程度的死亡率。另外对产后乳汁主要成分甘油三酯、乳糖和酪蛋白进行含量分析,发现模型组乳汁的甘油三酯、乳糖和酪蛋白都低于低脂组和加糖干预组。这些结果均表明PCL可以改善由于高脂饮食诱导造成的小鼠产后缺乳、乳汁成分质量下降和后代仔鼠生长缓慢且存活率低的现象。(4)高脂饮食诱导造成的产后缺乳可以通过PCL干预产后泌乳调控的相关信号通路来进行改善。高脂饮食会导致小鼠血液中催乳素含量下降,进而影响下游一系列关键蛋白的基因表达和活性转变,最后造成产后缺乳。本次实验结果表明,对比模型组,发现PCL可以提高血清中催乳素的含量。并且通过Western-blot分析,发现PCL可以提高小鼠乳腺中pJAK2(磷酸化JAK2)、PRLR(催乳素受体)、p63的蛋白表达量,并且降低Nrg1的蛋白表达量。另外免疫组化结果表明,PCL可以提高pSTAT5(磷酸化STAT5)的表达,PCR结果显示加糖干预组的ERBB4、p63和Gata-3的mRNA表达量都比模型组组要高,而加糖干预组的Nrg1的mRNA表达量比模型组要低。这些结果均表明,高脂饮食诱导造成的产后缺乳可以通过PCL干预产后泌乳调控的相关信号通路,从而促进乳腺细胞的增殖、分化、成熟达到最终可以分泌乳汁的效果。以上结果表明,PCL通过减少高脂饮食诱导造成的小鼠乳腺脂肪垫堆积过多,促进乳腺细胞的增殖和腔管细胞的分化成熟,最后达到改善产后缺乳的目的。