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本课题为黑龙江省博士后启动基金资助课题(NO.2003)。目的是研究松弛素样因子(relaxin-likefactor,RLF)在大鼠卵巢不同功能阶段中的表达趋势及影响RLFmRNA表达的可能机制,初步探讨RLF在雌性生殖方面的生理作用。
本实验分两部分:在体实验部分:采用RT-PCR方法,观察①生长期、②动情周期、③假孕模型、④妊娠期大鼠卵巢中RLFmRNA的表达趋势。
离体实验部分:采用RT-PCR方法,①观察体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞中RLFmRNA的表达:②研究血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)、FSH、forscolin、PMA对颗粒细胞中RLFmRNA表达的调节;③研究PAF、hCG、forscolin、PMA对黄体细胞中RLFmRNA表达的调节;④用放射免疫方法同步观察PAF对颗粒细胞雌二醇和黄体细胞孕酮分泌的影响。
在体实验结果:①在生长期,大鼠随着生长发育,卵巢RLFmRNA的表达逐渐增多,于青春前期达到峰值。②在动情周期中大鼠卵巢RLFmRNA的表达呈周期性变化,于动情前期和动情期表达增强,动情后期和动情间期表达减弱。③假孕模型中,未发育卵泡、窦前期卵泡、排卵前卵泡及早期黄体RLFmRNA的表达呈现持续的高水平,在成熟黄体和退化黄体表达降低。排卵前期卵巢RLFmRNA水平逐渐增高,呈时间依从性,排卵时(即hCG刺激后12小时)RLFmRNA水平降低,排卵后即早期黄体形成时RLFmRNA表达又增强。④RLFmRNA在大鼠妊娠过程的表达比较复杂,妊娠第一天处于早期黄体,卵巢RLFmRNA高水平表达,妊娠第三天RLFmRNA水平最低,随着妊娠的进展,卵巢RLFmRNA的表达逐渐增加,至中期达到高水平,持续到妊娠后期。分娩前后RLFmRNA的水平出现波动,临近分娩RLFmRNA升高明显。
离体实验结果:①RLFmRNA在体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞中均有表达;②颗粒细胞PAF、FSH、forscolin、PMA组RLFmRNA的表达均较对照组增强(P<0.05);③黄体细胞PAF、forscolin、PMA组RLFmRNA的表达均较对照组增强(P<0.05),但hCG组无明显变化;④PAF可明显刺激离体培养的颗粒细胞雌二醇的分泌及黄体细胞孕酮的分泌(P<0.05)。
结论:①RLFmRNA的表达可能与大鼠卵泡发育、排卵、黄体的形成和退化、妊娠的维持等雌性生殖的多个环节密切相关。②大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞中有RLFmRNA的表达,可能受PAF、FSH、PKA和PKC信号转导通路激动剂的正性调节。