第一部分：Clusterin基因沉默对人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡与侵袭性的影响目的：研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白(clusterin，CLU)的基因表达后，人脑胶质瘤U87细胞的增殖、侵袭及凋亡等生物学行为将会受到怎样的影响。方法：设计和合成靶向CLU的shRNA序列，并构建到慢病毒的载体plentilox3.7，包被能成功表达各种shRNA载体的慢病毒。将慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞，Real time-PCR检测CLU、MMP-2和TIMP-2基因mRNA水平，Western Blot技术检测CLU蛋白表达水平；运用MTT法、流式细胞仪Annexin V/PI及Transwell体外侵袭实验法评价检测CLU沉默后，对人脑胶质瘤U87细胞在增殖、凋亡及侵袭能力等方面所造成的影响。结果：特异性针对CLU基因全长mRNA的短发夹RNA（shRNA）在经过慢病毒包装后成功感染U87细胞，并在mRNA和蛋白水平上对CLU基因表达产生了特异性的抑制作用；通过MTT结果证实实验组细胞在sCLU表达受到干扰后，其增殖明显受抑，与各对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪Annexin V/PI法结果显示：实验组细胞凋亡率达（17.93±1.875）%，较各对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.01），空白对照及阴性对照组间无明显差异；侵袭实验结果提示实验组细胞侵袭能力受到抑制，实验组细胞穿膜数量为（27.99±6.53）个/每视野，较对照组明显降低，差异具有明显统计学意义（P<0.01）。Real-time PCR提示实验组侵袭性下降伴随着MMP-2mRNA水平下调及TIMP-2的mRNA水平上调，与各对照组相比，差异明显（P<0.05）。结论：干扰CLU基因表达明显抑制了人脑胶质瘤U87细胞的增殖、侵袭能力,并增加了其凋亡率。其侵袭性下降与侵袭相关因子金属蛋白酶MMP-2和其负性调节因子TIMP-2的表达比例改变有关。CLU基因有望成为胶质瘤治疗的新靶点。第二部分靶向沉默clusterin基因对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响目的：研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白(clusterin，CLU)基因表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响。方法：设计和合成靶向CLU的shRNA序列，并构建到慢病毒的载体plentilox3.7，以不针对任何基因的shRNA序列作为对照(对照shRNA)。包被能成功表达各种shRNA载体的慢病毒。将慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞，Real time-PCR法和Western Blotting法测定CLUmRNA表达和蛋白质表达水平，证实干扰效果。Western blotting方法检测Bax促凋亡相关信号分子的水平变化。给予不同放射剂量（2,4,6Gy）处理后，通过MTT法和克隆形成实验检测脑胶质瘤U87细胞的存活率和克隆形成率。2Gy照射后，流式细胞仪Annexin V/PI法检测各组细胞凋亡率。结果：慢病毒介导的靶向CLU基因的shRNA特异性地抑制了CLU基因表达，并显著上调促凋亡分子Bax蛋白水平。MTT及克隆形成实验结果显示：各组胶质瘤U87细胞存活率及克隆形成率与放射剂量呈负相关，而实验组存活率下降趋势更为显著，与对照组比较差异明显（P<0.05）。通过流式细胞仪Annexin V/PI法检测凋亡的实验结果发现：实验组细胞在经过2Gy剂量照射后凋亡率达到（25.63±1.97）%，较阴性对照组及空白对照组明显升高（增幅约12%），差异具有明显统计学意义（P<0.05）。结论：CLU基因沉默可能通过调控Bax蛋白的表达增加细胞凋亡率，从而明显增强脑胶质瘤U87细胞对放射的敏感性，有望成为增加脑胶质瘤放射敏感性的新靶点。