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本文在查阅大量文献的基础上,结合本实验室条件,采用新兴的共振光散射技术建立了几种新的DNA测定方法,并利用多种光谱手段探讨了其作用机理。 全文分为四章: 第一章:玫苯胺—DNA共振光散射体系的研究与应用。 研究了三苯甲烷类碱性染料玫苯胺与DNA作用的共振光散射光谱,发现在pH=10.3—11的范围内,玫苯胺在DNA表面聚集导致其共振光散射增强,在485nm处,存在一共振光散射增强峰,其强度与DNA的浓度呈线性关系,据此建立了一种测定DNA的共振光散射法。该方法简便、快速、灵敏度高,线性范围为0—1000μg/L,相关系数为0.9980,检出限为14.20μg/L。将该方法用于混合样品中DNA的测定,结果令人满意。 第二章:结晶紫—DNA共振光散射体系的研究与应用。 试验表明,在pH=9.2—10.5的Tris—NaOH缓冲溶液中,DNA的加入导致结晶紫共振光散射的增强,512nm处的共振光散射峰的增强与DNA浓度在0—900μg/L内呈线性关系,相关系数为0.9950,检出限可达5.02μg/L。方法已成功用于混合样品中DNA的测定。与其它测定DNA的共振光散方法相比,本方法的测量波长红移,可有效降低背景干扰,增强共振光散射信号。此外,本章结合共振光散射光谱和紫外吸收光谱初步探讨了两者的作用机理。 第三章:小檗碱—fsDNA共振光散射体系的研究与应用。 研究了中药黄连素的有效成分——小檗碱与fsDNA作用的共振光散射光谱。在pH=2.0—2.8的酸性介质中,小檗碱308nm处共振光散射峰的增强与fsDNA的浓度呈线性关系。方法的线性范围为0—600μg/L,相关系数为0.9972,检出限为19.92μg/L。方法已成功用于混合样品中fsDNA的测定。结合试验所得紫外—可见吸收光谱、共振光散射光谱和已有文献的研究结果,可推断小檗碱与 DNA作用经历了由以聚集结合方式为主到以嵌入结合方式为主的转 变。 第四章:灿烂甲酚蓝一皿阶体系作用机理及其分析应用。 第一节研究了灿烂甲酚蓝一DNA共振光散射体系。在 p炸0.&-1.5的Trigrryautl介质中,DNA使灿烂甲酚蓝共振光散 射增强,在347n处,共振光散射峰的增强与DNA浓度呈线性关 系。方法的线性范围为 SG--1000pg/L,相关系数为 0.9962,检出 限为 23.30V g/L。将该方法用于混合样品中 DNA的测定,结果令人 满意。 第H节研究了灿烂甲酚蓝一DNA荧光稗灭体系。在pH=5.a 9.0的范围内,于入 H81nm,入砰70。处k 可定量淬灭灿烂 甲酚蓝的荧光。方法的线性范围为 0.Ind.sing/L,相关系数为 0.9964,检出限为 88.01Vg/L。该方法具有较大的斯托克斯位移, 可有效降低背景干扰,提高测定的灵敏度。 第三节研究了灿烂甲酚蓝与DNA作用的紫外吸收、荧光、共 振光散射光谱,结合灿烂甲酚蓝本身在溶液中的存在状态,通过荧 光偏振、荧光狩灭等试验的研究结果,认为灿烂甲酚蓝与DNA的作 用随灿烂甲酚蓝与DNA质量比的减小经历了从以聚集结合方式为主 到以嵌入结合方式为主的转变。