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良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia, BPH)是中老年男性的常见病,严重影响患者的生活质量。其发病机制较为复杂,5α-还原酶在其中起重要作用。本文以油茶蒲为实验材料,以对5a-还原酶的抑制率为指针,采用大孔树脂柱层析、聚酰胺色谱法和制备液相逐级分离纯化得到抑制5a-还原酶的关键组分,采用MTT法和Annexin V/PI双染色法考察其对BPH-1细胞增殖、凋亡的影响,并进一步通过qRT-PCR测定关键组分对3个重要基因Bcl-2、Bax及hEGF表达的调控,初步探索其作用机理。主要研究结果如下：(1)优化了HPLC法5a-还原酶酶活检测体系,确定酶提取物的最佳添加浓度为4.004mg/mL,在优化后1.5mL反应体系条件下测得到阳性对照非那雄胺抑制5α-还原酶的IC50为0.164μg/mL,证实该反应体系稳定可靠。(2)运用超声波提取法,油茶蒲50%醇提物的得率为6.225%。(3)使用AB-8大孔树脂纯化油茶蒲醇提物,回收率为89.9%,其中活性部位40%乙醇洗脱相(OCE)得率为29.4%,其对5α-还原酶的抑制率为45.31%±0.44%。OCE经聚酰胺色谱法精制,得到11个分离部位,其中Fr2、Fr4、Fr6、Fr8得率较高,分别为1.30%、1.51%、1.55%和1.57%；Fr8对5a-还原酶的抑制率达到57.43%±0.39%,显著高于OCE的45.31%±0.44%(P<0.01),证实组分Fr8中活性成分得到有效纯化。制备液相精制Fr8,得到6个组分F1-F6,得率分别为5.93%、3.11%、4.78%、1.09%、6.70%和5.71%。对关键活性组分F3进行二次制备,分离得到两个分子量同为634的化合物P1和P2,二者易于相互转化且结构相似。(4)聚酰胺精制各组分可抑制BPH-1细胞增殖,其抑制率与体外对5a-还原酶的抑制率具有良好的相关性,相关系数达到0.772,两个不同实验模型结果相互印证；其中Fr8细胞增殖抑制率最高,100μg/mL作用浓度下抑制率可达39.43%±5.77%,与阳性对照非那雄胺相当。Fr8制备液相分离组分F2、F3和F5对BPH-1细胞增殖的抑制率显著高于Fr8(P<0.01),且在给药浓度范围内与作用浓度正相关,其抑制BPH-1细胞增殖的IC50分别为66.02μg/mL、56.30μg/mL和73.06μg/mL(5) Annexin V/PI双染色法测定细胞凋亡实验显示F2、F3和F5对BPH-1细胞具有一定诱导凋亡作用,组分F2在100μg/mL作用浓度下细胞诱导凋亡率达到12.67%±0.59%,与阳性对照非那雄胺相当。(6)实时荧光定量PCR显示给药浓度50μg/mL的F3作用24h可显著上调BPH-1细胞Bcl-2、Bax及hEGF基因的表达(P<0.01),且其较非那雄胺表达亦上调(P<0.05)。Bax基因上调幅度大于Bcl-2,推测Bax/Bcl-2比例上调可能是关键活性组分诱导BPH-1细胞凋亡的原因。F3与非那雄胺作用一致且上调表达强于非那雄胺,显示F3值得深入研究。油茶蒲提取物抑制5α-还原酶关键组分可抑制BPH-1细胞增殖及诱导其凋亡,尤其是组分F3,其由两个分子量一致、结构相似且易于相互转化的化合物组成,可能通过上调Bcl-2、Bax及hEGF基因的表达发挥作用,显示了良好的应用于前列腺增生药物开发的潜力。