论文部分内容阅读
花椰菜为十字花科芸薹属一年生植物,其肉质细嫩,味甘鲜美,且富含防癌、抗癌活性成分,是深受广大消费者喜爱的一种保健类蔬菜。但花椰菜作为甘蓝的一个变种,遗传背景十分狭窄,在我国花椰菜又是一个外来种,因此种质资源更为有限,严重制约我国花椰菜种质创新能力。为此,本研究借鉴模式植物拟南芥及其他作物器官发育,特别是影响器官大小发育机制的研究成果,综合利用生物信息学分析方法和分子生物学实验手段,探究ANT、ARGOS、EBP1和ARGOS-like(ARL)四个器官大小发育调控相关转录因子在花椰菜中的基因结构、转录特征及功能,力图在分子水平揭示不同基因在花椰菜器官发育过程中的作用及调控机制。
本研究主要内容包括:⑴从花椰菜中成功分离并克隆了ANT、ARGOS、EBP1和ARL四个基因的全长DNA及cDNA。⑵采用qRT-PCR技术分别对ARGOS、EBP1和ARL在花椰菜叶片不同发育期的表达特征进行定量分析,结果证实三个基因表达均随叶片发育而呈下降趋势,至衰老叶片表达量降到最低点。⑶成功构建ARGOS、EBP1、ARL三个基因的植物表达载体,采用农杆菌介导的浸花法转化拟南芥,筛选鉴定获得了三个基因的拟南芥转化株。⑷对转基因拟南芥进行表型及功能分析,证实异位表达花椰菜ARGOS、EBP1和ARL均能引起拟南芥侧生器官变大,生物量增加。⑸35S∷ARL转基因拟南芥叶片细胞学分析显示,ARL过表达可使叶表皮细胞数目显著增加,推测ARL在促细胞增殖过程中可能发挥重要作用。⑹采用农杆菌介导的侵染愈伤组织法转化花椰菜,成功获得ARL过表达花椰菜植株。表型分析结果显示,过表达ARL同样能够使花椰菜侧生器官变大,生物量提高。