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开花标志着植物从营养生长阶段进入生殖生长阶段,该过程受遗传和环境共同影响。在相同环境条件下,早开花意味着植物能够利用较少的能量进入生殖生长,这对于植物规避恶劣环境(如低温)完成生命周期有重要意义。番茄上,开花时间是一个由多基因控制的数量性状,开花早晚与熟性有较高的相关性。同时,早熟意味着较高的产值。因此,阐明开花时间的遗传基础具有重要意义。本研究以071-440(晚开花,P2)与Bone MM(早开花,P1)两个栽培番茄构建的F2群体为研究对象,利用混合分组(BSA)QTL-Seq技术定位主效QTLs,结合基因表达分析筛选候选基因,并对两个已报道的mi RNA进行了表达模式分析,获得的主要结果如下:1.基于QTL-Seq定位了7个与番茄早开花性状相关的主效QTL。以构建的1200个F2单株为研究对象,选取极端早熟和极端晚熟的各40个单株的DNA等量混合,组成两个子代池,与亲本池共同测序。采用QTL-Seq分析将番茄的早开花性状定位于1号染色体上,其物理区域为1.6Mb-71.8Mb。根据SNP-index的结果,在此区域发现了7个主效QTL位点,分别位于23.5Mb-24Mb、24Mb-28Mb、35Mb-40Mb、52.5Mb-54Mb、59Mb-62Mb、69Mb-72Mb和70Mb-74Mb之间。根据番茄基因组注释的结果,在上述区域预测得到了与早开花性状相关的7个基因,分别为EF1(Solyc01g017060),EF2(Solyc01g018000),EF3(Solyc01g034220),EF4(Solyc01g057370),EF5(Solyc01g058640),EF6(Solyc01g073700)和EF7(Solyc01g081360)。2.结合传统QTL分析,筛选获得了1个与番茄早开花相关的QTL。根据QTL-Seq分析的结果,在上述7个区域设计了143个Indel标记,随机挑选136个F2单株进行QTL分析。QTL分析结果表明:番茄早开花的QTL位于标记Fl-Indel 2和Fl-Indel 8之间,对应的物理位置为23.5Mb-25.3Mb。该区域与测序分析预测的23.5Mb-24Mb区间存在较高的一致性,即EF1所在的区域。3.对测序分析预测的7个基因,设计引物,利用实时荧光定量q PCR对7个基因在双亲间的表达进行了研究。结果表明7个基因中EF1在双亲中相对表达量最高,相对表达水平分别为219.34(P1)和73.46(P2),达到显著差异水平(P?0.05)。因此EF1可能参与了番茄开花时间的调控。经BLAST分析,该基因与番茄的Ycf2基因相似度较高。4.研究了mi R156和mi R172在番茄不同叶位(从下部向上,依次为第1,3,4,6,9,12片叶)的表达模式。结果显示,mi R156和mi R172在P1(早开花)中的表达随叶位增加表达量增加,均在第12片急剧升高,达到最高值,分别为1.12倍和4.88倍,而P1的始花节位为第6片叶。这两个mi RNA在P2(第12片叶始花)中的表达存在差异,mi R156在第3片叶时相对表达量最高(2.18倍),mi R172在第9片叶时相对表达量最高(62.12倍),第12片叶时表达量下降。因此,这两个mi RNA的表达与早开花没有必然的联系。