【摘 要】
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目的:研究LncRNA GAS5在TGF-β1诱导的足细胞损伤中的表达及其作用,为寻找修复足细胞损伤的新策略提供科学依据和理论基础。方法:（1）根据不同时间及浓度的TGF-β1处理将细胞进行以下分组:正常对照组;24h TGF-β1处理组;48h TGF-β1处理组;72h TGF-β1处理组;4ng/ml TGF-β1处理组;8ng/ml TGF-β1处理组;12ng/ml TGF-β1处理组。
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目的:研究LncRNA GAS5在TGF-β1诱导的足细胞损伤中的表达及其作用,为寻找修复足细胞损伤的新策略提供科学依据和理论基础。方法:（1）根据不同时间及浓度的TGF-β1处理将细胞进行以下分组:正常对照组;24h TGF-β1处理组;48h TGF-β1处理组;72h TGF-β1处理组;4ng/ml TGF-β1处理组;8ng/ml TGF-β1处理组;12ng/ml TGF-β1处理组。采用RT-q PCR法检测Synaptopodin mRNA、CD2AP mRNA及LncRNA GAS5的表达情况。（2）将LncRNA GAS5过表达载体及低表达载体转染正常足细胞并进行分组:正常对照组;si-GAS5组;si-NC组;GAS5组;pc DNA组;采用RT-q PCR法验证LncRNA GAS5的转染效率并检测Synapt opodinmRNA和CD2AP mRNA的表达情况。（3）将LncRNA GAS5过表达载体及低表达载体转染TGF-β1诱导的足细胞并进行分组:正常对照组;TGF-β1处理组;TGF-β1+si-GAS5组;TGF-β1+si-NC组;TGF-β1+GAS5组;TGF-β1+pc DNA组。采用RT-q P CR法验证LncRNA GAS5转染效率,联合RT-q PCR法和Western blot法检测Synapto podin、CD2AP的mRNA和蛋白的表达情况。结果:（1）将各实验组与正常对照组进行对比,8ng/ml TGF-β1处理组、12ng/ml TGF-β1处理组、48h TGF-β1处理组、72h TGF-β1处理组中SynaptopodinmRNA、CD2AP mRNA及LncRNA GAS5表达降低（P＜0.05）。（2）将各实验组与正常对照组进行比较,si-GAS5组LncRNA GAS5表达较正常对照组降低,而GAS5组LncRNA GAS5表达升高,si-GAS5组Synaptopodin及CD2AP的mRNA表达均降低,GAS5组Synaptopodin及CD2AP的mRNA表达均升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（3）与正常对照组相比,TGF-β1+si-GAS5组、TGF-β1+si-NC组、TGF-β1+pc DNA组中Synaptopodin及CD2AP的mRNA和蛋白表达均降低,TGF-β1+GAS5组SynaptopodinmRNA、CD2AP mRNA及Synaptopodin蛋白表达均上升（P＜0.01）,但TGF-β1+GAS5组CD2AP蛋白表达未见明显改变。（4）与TGF-β1处理组相比,TGF-β1+si-GAS5组Synaptopodin及CD2AP的mRNA和蛋白表达均降低,TGF-β1+GAS5组Synaptopodin、CD2AP的mRNA及蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:（1）TGF-β1可通过下调Synaptopodin、CD2AP和LncRNA GAS5的表达而诱导足细胞损伤;在一定范围内,TGF-β1的浓度越高、作用时间越久则损伤程度越重;LncRNA GAS5可能参与TGF-β1诱导的足细胞损伤。（2）LncRNA GAS5与足细胞损伤密切相关,低表达LncRNA GAS5可通过下调Synaptopodin、CD2AP表达来加重TGF-β1诱导足细胞损伤的程度,而过表达LncRNA GAS5可逆转这一作用。
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