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刺参(Apostichopus japonicus)隶属棘皮动物门海参纲,后口动物,是无脊椎动物中与脊索动物最为相似的类群,同时,刺参也是我国重要的海珍品,具有很高的经济价值。近几年刺参养殖业发展迅速,但养殖技术却比较粗糙,在刺参养殖规模不断扩大的同时,其种质、病害、环境和产品品质等问题日趋凸显,刺参养殖中同一批出塘的刺参规格差异巨大,会直接影响养殖效益。现有研究发现造成这种差异的外界因素有密度、社会等级、物理接触等,同时也有研究发现不同规格的刺参免疫力方面也存在一定差异,但关于免疫力与刺参生长方面的关系尚无明确定论。本实验对不同规格野生和养殖刺参的免疫力进行了研究,通过比较体腔细胞密度、数量及免疫酶活性、免疫基因表达等方面的差异系统分析了体质量及生活环境与刺参免疫力的关系,研究结果为进一步弄清刺参免疫机制以及刺参免疫指标的建立提供了基础实验依据。本实验对不同规格野生(70 g组、110 g组和150 g组)和养殖(30 g组、70 g组和110g组)刺参体腔液容积、体腔细胞密度和数量进行了比较分析。结果发现养殖与野生刺参体腔液容积都随体重增加而增加,不同规格刺参的体腔液容积差异极显著(P<0.01);70/g组的养殖和野生刺参差异不显著(P>0.05),110 g组的养殖刺参体腔液容积显著高于同规格的野生刺参(P<0.05)。不同规格的刺参体腔细胞总密度差异不显著(P>0.05);70 g与110 g组养殖与野生刺参总体腔细胞密度差异均不显著(P>0.05)。不同规格刺参体腔细胞总数差异极显著(P<0.01),无论野生刺参还是养殖刺参总体腔细胞数量均随体重的增加而增加,70 g与110 g组养殖与野生刺参总体腔细胞数量差异均不显著(P>0.05)。通过对不同类型体腔细胞的密度和数量研究发现,不同规格养殖刺参各类型体腔细胞密度无显著差异(P>0.05),但野生刺参150 g组的球形细胞密度显著高于70 g和110 g组。通过比较同种规格下养殖刺参和野生刺参发现,110 g组养殖刺参球形细胞和淋巴细胞密度都显著高于野生刺参(P<0.05)。本实验对不同规格野生(70 g组、110 g组和150 g组)和养殖(30 g组、70 g组和110g组)刺参体腔液上清免疫酶活力进行了比较分析。结果发现养殖与野生刺参110 g组体腔液上清ACP活性均显著高于其他两组(P<0.05),相同规格养殖与野生刺参无显著差异(P>0.05);养殖与野生三种规格刺参体腔液上清AKP活性均无显著差异(P>0.05),相同规格养殖与野生刺参也无显著差异(P>0.05);养殖刺参30 g组体腔液上清SOD活性显著高于其他两组(P<0.05),野生刺参三种规格之间无显著差异(P>0.05),相同规格养殖与野生刺参间无显著差异(P>0.05);养殖刺参110 g组体腔液上清CAT活性显著高于其他两组(P<0.05),野生刺参三种规格之间无显著差异(P>0.05),相同规格养殖与野生刺参间无显著差异(P>0.05)。本实验通过实时荧光定量PCR技术对不同规格养殖刺参(30 g组、70 g组和110 g组)体腔内体腔细胞和波里氏囊内体腔细胞免疫相关基因(AjNLRP3、AjC3、AjRac1、AjMKK3/6、AjTRAF3、Aj-iLys、AjAP-1、AjTLR3、AjToll)相对表达进行了比较分析。通过比较体腔内体腔细胞中免疫相关基因的相对表达量,发现70 g组9个基因的相对表达水平都显著高于110 g组;30 g组的AjC3、AjRac1、AjMKK3/6、Aj-iLys、AjTLR3、AjToll共6个基因的相对表达水平都显著高于110 g组;70 g组的AjNLRP3、AjTRAF3、AjMKK3/6和AjC3相对表达水平显著高于30 g组,而两组之间在AjAP-1、AjTLR3、AjToll和AjRac1之间并无显著差异。综合上述结果,我们可以得出如下结论:70 g组养殖刺参体腔内体腔细胞中免疫相关基因相对表达水平最高,其次是30 g组,110 g组最低。通过比较波里氏囊内体腔细胞9个免疫相关基因的相对表达量,发现不同组别之间的差异与体腔内体腔细胞的规律不同,30 g组和110 g组相比9个基因的相对表达水平均无显著差异;70 g组的AjNLRP3、AjRac1、AjToll和Aj-iLys相对表达水平显著高于30 g组,而两组之间AjTRAF3、AjMKK3/6和AjC3基因之间无显著差异;70 g组的AjC3、AjAP-1和AjTLR3基因相对表达水平显著低于110 g组,AjNLRP3、AjToll和Aj-iLys基因相对表达水平显著高于110 g组,AjMKK3/6、AjRac1和AjTRAF3基因相对表达水平两组之间无显著差异。综合上述结果,我们可以得出如下结论:30 g组和110 g组养殖刺参波里氏囊内体腔细胞中免疫相关基因相对表达水平基本一致,70 g组与30 g组和110 g组相比不同基因相对表达水平差异不同。