猪圆环病毒病(porcine circovirus diseases，PCVD)呈世界性分布，是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的，以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病。2000年左右，PCVD在亚洲首次出现，近年在我国普遍发生，严重威胁我国养猪业。当前并无治疗PCVD的药物，疫苗接种是控制该病的有效手段。为了开发亚单位疫苗，本实验利用昆虫杆状病毒系统表达PCV2的Cap蛋白和Rep蛋白。　　本研究通过PCR扩增PCV2的ORF2基因，将其克隆入转移载体pFastBacHTA，然后将构建的重组转移载体在Tn7转座子的作用下与E.coli DH10Bac感受态细胞中的杆状病毒基因组发生转座。通过抗性和蓝白斑筛选，获得重组穿梭载体rBacmid-ORF2，转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-Cap。经间接免疫荧光(Cohen et al.)和免疫印迹试验(WB)证实，PCV2 Cap蛋白基因在Sf9细胞内成功表达。进一步从不同时间和感染复数优化病毒扩增条件，并对Cap蛋白的表达条件进行优化。结果显示，当以MOI值为0.2接种Sf9细胞96h时，收获的重组杆状病毒滴度为107TCID50/0.1 ml，相对于其他MOI值接种病毒滴度最高，所以，以MOI值为0.2感染Sf9细胞96h为最佳病毒扩增条件。同时，以MOI值为2感染Sf9细胞96h为最佳蛋白表达条件。透射电镜观察结果显示，利用蔗糖密度梯度离心纯化的产物可观察到病毒样颗粒。之后进一步对PCV2 Cap蛋白的分泌性表达进行研究。将扩增的PCV2ORF2基因和去核定位信号的ORF2基因分别克隆到带有polyhedrin启动子和gp67强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP76A中，构建重组载体pAcGP76A-ORF2和pAcGP76A-ORF2-△NLS，与致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒基因组共转染到昆虫Sf9细胞，构建重组杆状病毒rAc-Cap和rAc-dCap。将转染后的细胞用IFA检测，细胞培养上清用Western Blot分析。结果表明，细胞内表达产物和细胞上清均与Cap单抗发生特异性反应，重组蛋白实现了分泌性表达。　　本研究对PCV1和PCV2的ORF1基因按照昆虫细胞密码子偏爱性进行优化，设计引物经两轮PCR化学合成全长基因，将PCV1和PCV2的ORF1基因分别克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTA中，然后将构建的重组转移载体在Tn7转座子的作用下与E.coli DH10Bac感受态细胞中的杆状病毒基因组发生转座。通过抗性和蓝白斑筛选，获得重组穿梭载体rBacmid-PCV1-ORF1和rBacmid-PCV2-ORF1，转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-PCV1-Rep和rBac-PCV2-Rep。经间接免疫荧光和蛋白免疫印迹试验证实Rep蛋白在Sf9细胞中被表达。进一步从感染复数对Rep蛋白表达条件优化，结果显示，以MOI值为10感染Sf9细胞96h为PCV1 Rep蛋白最佳表达条件，以MOI值为5感染Sf9细胞96h为PCV2 Rep蛋白最佳表达条件。