G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)可以通过采取不同的活性构象,通过G蛋白依赖或非G蛋白依赖的途径进行细胞信号转导。近年来,越来越多的目光关注到GPCR的非G蛋白依赖途径即募集抑制蛋白的信号通路中。许多研究已经表明,GPCR的胞内端是其募集抑制蛋白的关键,胞内端存在部分可以发生磷酸化的氨基酸位点,这些位点在发生磷酸化后携带负电荷,会吸引携带正电荷的抑制蛋白分子,二者通过静电吸引形成相互作用界面,完成GPCR对抑制蛋白的募集,使受体脱敏并内化,进而激活下游的信号分子。在之前的研究中发现,GPCR各家族的胞内端均存在排列顺序相似的氨基酸序列,这些序列都含有三个可发生磷酸化的位点(丝氨酸或苏氨酸),称之为磷酸化密码。但磷酸化密码是否影响GPCR对抑制蛋白的募集,以及其在其他信号通路中具体起到何种作用,还未曾进行研究。本文通过对血管紧张素Ⅱ(Ang II)1型受体(AT1-R)的两组磷酸化密码以及胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)的三组磷酸化密码分别进行突变,观察到当磷酸化密码无法完成磷酸化时,受体对抑制蛋白的募集作用被完全抑制,证明了磷酸化密码确实是受体募集抑制蛋白的关键。接下来我们对AT1受体的两组磷酸化密码分别进行单点突变和两两组合的双点突变,发现不同的突变使受体在募集抑制蛋信号通路中均与野生型受体有增强或减弱的趋势,揭示了磷酸化密码中每个氨基酸位点的作用。为了探究磷酸化密码在其他细胞信号转导通路中的作用,我们检测了所有突变体G蛋白解离途径的信号强弱。在比较突变体对两条信号通路的影响后我们发现,当受体某些位点的突变导致其中一条信号通路强度减弱时,受体则会偏向于激活另一条信号通路。这些现象证实了磷酸化密码对受体在募集抑制蛋白以及G蛋白依赖信号通路中的的作用,并且通过两种信号通路之间的强度变化揭示了受体一种新的偏向性信号转导方式。