菊花再生体系的建立及根癌农杆菌介导DAD1基因转化体系的优化

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本研究以菊花品种“国华光娣”为实验材料,建立了菊花再生体系及根癌农杆菌介导的遗传转化体系,并将DAD1基因导入菊花中,以期获得抑制或促进细胞凋亡的菊花新材料。其主要结果概述如下:1.通过研究不同生长调节剂的浓度配比对菊花愈伤组织、不定芽和根诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织、不定芽和根的最佳培养基,优化了菊花再生体系。实验结果表明:菊花叶盘在MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)培养基上诱导愈伤组织效果最好。愈伤组织在分化培养基为MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)上,分化率可达95%,繁殖系数为2.57。再生芽在1/2MS+NAA(0.2mg/L)培养基上经过9天左右可诱导出根,生根率可达100%。2.在建立了菊花再生体系的基础上,构建了正反义DAD1基因的表达载体。通过PCR将DAD1基因的cDNA序列从T载体上释放,正反向插入到植物表达载体pWM101中,将其置于35S启动子下游,并采用PCR和酶切验证,获得了在植物中的表达载体。3.根癌农杆菌介导菊花转化最佳条件的确定。实验结果表明:叶盘预培养1d、OD600=0.6、侵染10分钟、共培养3d和延迟筛选时间2d,菊花遗传转化率最高。4.转基因菊花的PCR检测。经抗性筛选得到的转基因苗,通过PCR扩增,部分转基因植株中检测出有目的基因DAD1正反义基因的存在,说明已将目的基因成功插入到菊花的基因组中。其中反义转化率为7.1%,正义转化率为14.3%。
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