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利用饱和硫酸胺分步盐析法,提纯鳜鱼抗嗜水气单胞菌(命名GYK-1)血清免疫球蛋白(Ig)。提纯的鳜鱼免疫球蛋白免疫Balb/C小鼠,无菌条件下取其脾脏细胞与SP2/O骨髓瘤细胞杂交融合。抗体阳性的杂交瘤细胞用间接ELISA方法进行筛选。经筛选、二次亚克隆,最终获得11株能稳定分泌抗鳜鱼Ig的单克隆抗体(Mab)细胞株,分别命名为:3D5-H7,3D3-A6,4C1-H11,7F12-F6,1F12-A3,4D3-A7,3F8-H3,3A5-D11,5C3-A7,5D11-F9和6G6-A11。并对这些单抗的特性进行了分析。抗体的亚级份测定结果表明:其中有IgG1有5株(3D3-A6、4C1-H11、7F12-F6、1F12-A3和5C3-A7),IgG3有3株(4D3-A7、3F8-H3和3A5-D11),IgM有2株(3D5-H7、6G6-A11),IgA有1株(5D11-F9)。特异性分析结果证实,Mab7F12-F6仅识别鳜鱼血清Ig,具有很好的特异性;Mab 1F12-A3、4D3-A7、3F8-H3、3A5-D11、5C3-A7、5D11-F9、6G6-A11能识别鳜鱼和日本鳗、欧洲鳗血清Ig,但与欧洲鳗血清的交叉反应更强;Mab 3D5-H7、3D3-A6、4C1-H11除了与鳜鱼、日本鳗和欧洲鳗血清反应,还能和淡水白鲳血清Ig发生交叉。所有单抗与石斑鱼、大黄鱼等海水鱼和罗非鱼、鲶鱼、鲫鱼、鲤鱼、鲈鱼等淡水鱼血清Ig,以及气单胞菌、大肠杆菌、爱德华氏菌、弧菌、沙门氏菌等19种水产动物病原微生物均无任何交叉反应。这些单抗的腹水抗体ELISA效价在10~4～10~6之间。单抗对鳜鱼免疫球蛋白灵敏度检测结果显示,所有单抗均能检测出39ng的蛋白含量,有两株甚至能检测出15ng的蛋白。上述结果提示,不同鱼类的免疫球蛋白既有自身的特异性抗原位点,也存在共同的抗原决定簇。这些共同抗原决定簇不仅存在于近亲品种之间,3D5-H7、3D3-A6、4C1-H11 3株单抗与淡水白鲳血清Ig的交叉就证明了这一点,即鲈形目不同种属之间的血清Ig之间有一定的相似度:也存在于亲缘距离较远的之间,如鳜鱼、鳗鱼。从单抗与欧洲鳗、日本鳗血清的交叉程度不同还可看出,欧洲鳗与日本鳗血清Ig之间有高度的相似性,但又存在着种属的差异。 又利用鳜鱼单克隆抗体腹水7F12F6交联Sepharose 4B制备亲和层析柱。通过免疫亲和层析纯化鳜鱼血清Ig。用亲和层析纯化出的鳜鱼Ig免疫新西兰兔,制各了兔抗鳜鱼Ig的多抗血清。用ELISA方法对单抗和多抗的特性进行