【摘 要】
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绵羊胃肠道微生物组成复杂,消化道疾病对其畜牧生产最具危害性,乳酸杆菌不仅可替代抗生素增加动物产出,其诱导肠道黏膜免疫的生物活性受到广泛关注,但少见羊源益生菌的分离、筛选以及对胃肠生理功能影响的研究,本研究拟从健康绵羊粪便中分离一株具有益生功能且安全的乳酸杆菌,通过DSS结肠炎模型探究其对肠道黏膜免疫功能的影响,丰富乳酸杆菌与肠道黏膜免疫互作的研究,也为促进绵羊肠道黏膜免疫提供科学试验数据。本研究结
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“阿勒泰羔羊细菌性腹泻与肠道菌群及肠道黏膜屏障相关性研究” （项目编号:32160823）课题主持人:王金泉 教授（新疆农业大学动物医学学院）；
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绵羊胃肠道微生物组成复杂,消化道疾病对其畜牧生产最具危害性,乳酸杆菌不仅可替代抗生素增加动物产出,其诱导肠道黏膜免疫的生物活性受到广泛关注,但少见羊源益生菌的分离、筛选以及对胃肠生理功能影响的研究,本研究拟从健康绵羊粪便中分离一株具有益生功能且安全的乳酸杆菌,通过DSS结肠炎模型探究其对肠道黏膜免疫功能的影响,丰富乳酸杆菌与肠道黏膜免疫互作的研究,也为促进绵羊肠道黏膜免疫提供科学试验数据。本研究结果如下:1.采集新鲜健康绵羊粪便样品共13份,初分离得到了55株乳酸菌（编号:Y1～Y55）,革兰氏染色后选择其中呈杆状的5株分离菌进行益生潜力测试,其中分离株Y15能耐受p H=3和1%浓度的胆盐,对青霉素G、头孢噻肟、氨苄西林、克林霉素、红霉素和四环素敏感,对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、磺胺异恶唑、诺氟沙星、恩诺沙星、万古霉素表现耐受,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制活性较好,无溶血活性,经过生化试验结合测序结果确定其为弯曲乳杆菌,并将其命名为弯曲乳杆菌Y15,此外,其在37℃下迅速生长至16 h到达稳定期且具有良好的产酸能力。2.在小鼠体内评估弯曲乳杆菌Y15的安全性。将20只雄性SPF级20±2 g的昆明小鼠随机分对照组和实验组两组,分别灌胃无菌PBS溶液和10~8 CFU/m L的弯曲乳杆菌Y15菌悬液0.2 m L,连续10天,期间施用弯曲乳杆菌Y15对小鼠体征、分泌物、排泄物、体增重和采食量均无影响。解剖后,所有小鼠体腔内脏器没有明显眼观病理变化,空肠和结肠组织无异常组织病理学变化。与对照组相比,Y15不影响小鼠脾脏指数、肾脏指数、血常规指标、血清ALT和血清BUN含量,但Y15组肝脏指数变小（P＜0.05）,Y15组血清TP含量更高（P＜0.05）。3.探究弯曲乳杆菌Y15对DSS结肠炎模型小鼠的影响。选用雄性SPF级昆明小鼠,每天灌胃0.2 m L无菌PBS或弯曲乳杆菌Y15（10~8 CFU/m L）,持续14天,第8天开始在饮用水中添加5%DSS诱导结肠炎,ELISA法检测到弯曲乳杆菌Y15显著增加结肠黏膜中Ig A和Muc2的含量（P＜0.05）,有降低促炎细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）的趋势,但差异不显著,HE和PAS染色观察到弯曲乳杆菌Y15恢复DSS处理下受损的结肠组织和杯状细胞数量,Q-PCR检测到弯曲乳杆菌Y15上调了Muc2 m RNA的表达（P＜0.05）,维持Dll 1 m RNA的表达量,以及抑制Notch信号通路相关基因Notch 1和Hes 1 m RNA的表达（P＜0.05）。综上所述:弯曲乳杆菌Y15满足益生菌的安全要求,可通过调节免疫和抑制Notch信号通路过度活化,促进肠道黏膜免疫,缓解DSS诱导的小鼠结肠炎。
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