现代水产养殖操作经常将鱼暴露于各种急性应激,这些应激可能对鱼类的生存、生长和动物福利等产生负面影响。麻醉剂可以缓解鱼类的疼痛、诱导镇静并减少操作应激对鱼类的影响。已有研究表明,麻醉剂能够降低操作给机体带来的应激反应;但麻醉剂做为药物,自身也是一种应激源。麻醉剂作为二次应激源已被广泛报道,鳃是鱼类麻醉应激损伤的主要靶器官。本研究以中国南方重要的经济鱼类品种中国花鲈(Lateolabrax maculatus)为研究对象,首先,比较了丁香酚和三卡因(MS-222)对中国花鲈幼鱼麻醉效应及模拟麻醉运输效果;再者,评价了2种麻醉剂对中国花鲈幼鱼的麻醉损伤作用,并初步探究其麻醉应激损伤机制;最后,分别分析了透皮促进剂对麻醉剂促透效果和替普瑞酮(Teprenone)对花鲈麻醉应激损伤的保护作用,以期为降低中国花鲈麻醉应激损伤提供有效方案。具体研究结果如下:1. 丁香酚和MS-222对中国花鲈幼鱼麻醉效应及模拟麻醉运输效果研究比较了丁香酚和MS-222对中国花鲈幼鱼的麻醉效应,并分析其对中国花鲈幼鱼模拟麻醉运输的作用效果。麻醉效应实验将幼鱼分为两组,每组测试7个浓度(丁香酚[4、6、8、10、12、14和16 mg/L]和MS-222[20、30、40、50、60、70和80 mg/L])。记录诱导和复苏时间。随着麻醉剂浓度的增加,麻醉时间减少,完全复苏时间延长。得出6 mg/L的丁香酚和30 mg/L的MS-222最适运输。在5 h模拟麻醉运输实验中,麻醉处理组幼鱼成活率为100%,非麻醉组成活率为60%;经运输后恢复24 h,麻醉组幼鱼成活率为100%,非麻醉组的成活率为40%。与非麻醉组相比,麻醉组天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性显著升高(p<0.05)。MS-222运输组AST、ALT、碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于丁香酚运输组(p<0.05)。非麻醉运输组AKP活性显著高于麻醉组(p<0.05)。根据实验结果比较,丁香酚对中国花鲈是一种有效和副作用较小的麻醉剂,因此,推荐丁香酚作为短途运输中国花鲈的麻醉剂。2. 丁香酚和MS-222对中国花鲈幼鱼的麻醉损伤研究研究探讨了50 mg/LMS-222和10 mg/L丁香酚麻醉处理对中国花鲈生理和免疫的影响。免疫相关指标测定结果显示,MS-222和丁香酚处理均降低了皮肤黏液和鳃组织中总免疫球蛋白(总Ig)的含量,增加了AKP的活性。此外,丁香酚处理增加了溶菌酶(LZY)活性,MS-222则相反。麻醉处理也促进了鳃细胞色素C、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达,可能是MS-222和丁香酚诱导了鳃细胞凋亡。应激相关指标结果表明,麻醉处理显著改变了鳃细胞热休克蛋白70(HSP70)浓度和Na~+/K~+-ATPase(NKA)的活性。麻醉复苏后3-6 h,鳃内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)浓度升高,可能是麻醉诱导了氧化应激和脂质蛋白损伤。实验结果将为麻醉风险评估提供指标依据。3. 石菖蒲挥发油和水溶性氮酮对鱼用麻醉剂的促皮渗透效果研究透皮促进剂(Penetration Enhancers,PE)可以改变机体角质层的屏障功能,增加药物经皮肤到达体内的通透率,从而减少药物给药次数和剂量。本文研究了石菖蒲(Acorus tatarinowii)挥发油和水溶性氮酮这2种常见透皮促进剂(PE)的4 种不同质量分数(1%、4%、7%、10%和1%、3%、5%、10%)对中国花鲈幼鱼药浴吸收MS-222和丁香酚的促透效果。实验发现:(1)2种PE可显著降低入麻与复苏时间,并降低丁香酚或MS-222的使用剂量以达到相似麻醉效果。(2)2种PE的促透效果随浓度升高先增强后减弱。(3)石菖蒲挥发油与水溶性氮酮对丁香酚或MS-222的最佳促透质量分数分别为7%和3%。分析鳃组织抗氧化指标发现:(1)丁香酚和MS-222浸泡对中国花鲈鳃组织造成一定程度的氧化应激,表现为鳃组织中氧化物酶POD、SOD、CAT活性和GSH、MDA浓度显著(P<0.05)升高。(2)联合使用PE,可降低麻醉剂用量,进而降低鳃组织氧化应激,表现为麻醉协同组鳃中SOD、CAT活性和MDA、GSH浓度显著(P<0.05)低于麻醉对照组。研究结果可为PE在水产中的应用提供实验依据,亦可为提高麻醉剂使用效果提供数据参考。4. 替普瑞酮对中国花鲈幼鱼鳃组织麻醉应激损伤防护研究研究了预拌喂替普瑞酮对中国花鲈幼鱼麻醉损伤的保护作用。结果如下:(1)MS-222和丁香酚处理均显著(p<0.05)降低鳃组织NKA活性,诱导HSP70合成,预拌喂替普瑞酮能够显著提高NKA活性和HSP70表达(p<0.05)。(2)麻醉剂对照组鳃细胞凋亡因子活性显著提高(p<0.05),替普瑞酮处理组能够显著抑制细胞凋亡因子活性(p<0.05)。(3)与正常对照组相比,麻醉对照组鳃组织形态表现为鳃小片(GL)排列不整齐;线粒体丰富细胞(MRC)所处的位置体积变大;血管道(BC)增宽,内部红细胞出现了肿大;扁平上皮细胞(PVC)出现了脱落,其整体结构偏离正常形态。而替普瑞酮处理组,其麻醉后鳃组织结构仍能维持正常形态。综上所述,(1)丁香酚和MS-222均能很好运用于中国花鲈幼鱼麻醉与麻醉运输;(2)麻醉剂作为应激源,易造成机体麻醉应激损伤,主要表现为:引起鳃组织氧化损伤,影响鳃组织形态,降低鳃细胞的渗透压调节功能,改变非特异性免疫酶活性及相关蛋白表达,促进细胞凋亡因子活性,且随着麻醉剂浓度的增加,复苏率降低;(3)通过联用透皮促进剂减少麻醉剂剂量,可降低麻醉应激所引起的氧化损伤;(4)通过预拌喂替普瑞酮以诱导鳃组织热休克蛋白70表达,可对麻醉损伤起到一定防护作用。