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第一部分细粒棘球病对于免疫细胞亚群分布的影响目的:探讨通过检测细粒棘球蚴病(echinococcosis granulosa)患者体内和其囊液在体外对于免疫细胞亚型分布的影响,了解细粒棘球蚴病对于机体内免疫细胞亚群分布情况会产生哪些影响。方法:1.收集32例于2016年1月~2016年7月期间在四川省人民医院细胞移植中心接受治疗的细粒棘球蚴病患者的外周血,按是否接受手术切除病灶将其分为手术前组(n=16)和手术后组(n=16)。经过处理后得到患者全血中的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)通过加入相应的免疫细胞对应的流式抗体后,通过流式细胞仪(Flow cytometry)检测NK细胞,CD4+T细胞和CD8+T细胞在免疫细胞中的分布情况。2.细粒棘球蚴囊液来自于细粒棘球蚴病人手术中切除的细粒棘球蚴囊泡,选取囊泡中子囊的囊液进行离心滤菌等处理后得到细粒棘球蚴囊液,8~10周雌性C57/B小鼠的脾细胞与细粒棘球蚴囊液(Hydatid cyst fluid,HCF)混合培养:实验组为小鼠脾细胞分别与蛋白含量为5mg/ml,1mg/ml,100ug/ml细粒棘球囊液进行混合培养,对照组为加入完全培养基与小鼠脾细胞培养,混合培养24h,48h后用流式细胞仪(Flow cytometry)技术检测小鼠脾细胞中的CD4+T细胞、CD8+T细胞在免疫细胞中的分布情况。结果:1.患者全血单个核细胞(PBMC)中NK细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞以及CD4/CD8在手术治疗前后细胞的分布情况没有统计学意义(P>0.05)。2.患者全血单个核细胞中效应CD4+T细胞手术前后细胞分布情况存在统计学意义(P<0.05),而效应CD8+T细胞手术前后细胞分布没有统计学意义(P>0.05)。3.小鼠脾细胞和囊液混合后,发现囊液对于CD4+T细胞分布起抑制作用具有统计学意义(P<0.05),而囊液对CD8+T细胞分布的影响不具有统计学意义(P>0.05)。结论:1.患者体内包虫病灶被切除后,患者外周血中效应CD4+T细胞所占免疫细胞群中的比率有所上升。2.细粒棘球蚴囊液对小鼠脾细胞中CD4+T细胞在免疫细胞中分布有抑制作用。第二部分探索细粒棘球蚴囊液对于免疫细胞能量代谢的影响目的:探讨细粒棘球蚴囊液对免疫细胞能量代谢表型是否存在重新编码,为研究细粒棘球蚴病免疫逃逸的机制提供新的思路。方法:细粒棘球蚴囊液来自于细粒棘球蚴病人手术中切除的细粒棘球蚴囊泡,选取囊泡中子囊的囊液进行离心滤菌等处理后得到细粒棘球蚴囊液。从液氮中取Jurkat细胞系将其复苏,待其复苏后传代一次,用传代后的Jurkat细胞与细粒棘球蚴囊液(Hydatid cyst fluid,HCF)混合培养24h作为实验组(n=10),不加入囊液的Jurkat细胞为对照组(n=10),通过细胞外能量代谢检测仪(Extracelluar Flux Analyzer,EFA)检测Jurkat细胞的能量表型(Cell energy phenotype,CEP)的分布情况。结果:1.Jurkat细胞和细粒棘球蚴囊液混合培养组中能量代谢潜在能力明显低于无囊液混合培养Jurkat细胞组2.实验组中加入药物刺激后Jurkat细胞能量代谢表型还是在糖酵解象限(Glycolytic quadrant),而对照组中Jurkat细胞能量代谢表型是在代谢旺盛象限(Energetic quadrant)。结论:1.细粒棘球蚴囊液对于Jurkat细胞能量代谢的潜在能力有抑制作用。2.通过抑制免疫细胞能量代谢的潜能,使得免疫细胞的生物学功能受到影响从而抑制免疫应答。