激素类及其相关蛋白基因的克隆、测序和mRNA表达的研究

来源 :中国农业科学研究院 中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:asdxxx123
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随着科学的发展及各学科之间理论和方法的相互交叉和渗透,加快了分子生物学发展和成熟的步伐。特别是近些年来涌现出了许多本学科的新技术、新方法、新理论和新思维以及人类基因组计划的完成和相继开展的人类后基因组计划的研究成果,极大地丰富了分子生物学的理论宝库。同时,分子生物学也面临着新世纪实质性、关键性问题的挑战,即未来分子生物学将从基因组而不只是个别基因的结构和功能及其进化的观点来重新探讨生物的遗传、发育和进化以及功能调控等基本问题。因此,以人类基因组计划的研究成果为基础,广泛深入地开展农业经济动物的基因组和蛋白质组的研究,对于从分子水平探讨优良畜禽品种的遗传、发育、进化和基因的表达与调控的机理及其遗传育种工作均有着重大的现实意义和深远的历史意义。本实验以大鼠、小鼠、人、犬、鲤鱼和牛蛙的组织为研究材料,对26个激素类及其相关蛋白的基因片段进行了克隆和测序工作。同时,以其中的部分基因片段为探针,采用Northern Blot杂交、免疫组织化学(immunohistochemistry)、组织原位杂交(in situ hybridization)等方法,对不同组织中的mRNA的定位、定性、定量、特定表达和时空表达等进行了基础性的研究工作。其中所克隆的26个基因的琼脂糖凝胶电泳结果和测序结果相一致,说明所克隆的基因是目的基因;Northern Blot杂交和放射自显影的杂交带光密度扫描积分吸光密度值的测定,其结果显示出实验组和对照组的mRNA在不同组织和同一组织中表达水平上的差异;组织原位杂交的结果表明,慢性酒精作用增加的大鼠脑脉络膜Bkca通道mRNA的表达水平与控制条件相关。Bkca通道在酒精存在的状态下,在控制脑脊液的产量方面起关键性的作用;PACAP既参与颗粒细胞内类固醇的生成又在间质细胞内促使排卵。为了排卵PACAP至少在排卵前卵泡的颗粒细胞中通过与他的受体结合起到调节促性腺激素的作用。本实验的其目的在于为今后广泛深入地开展优良畜禽品种的结构基因组和功能基因组的研究和遗传育种工作奠定实验材料、方法、技术和理论等方面的基础。
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