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目的:探究转谷氨酰胺酶1(transglutaminase 1,TGM1)基因过表达对乳腺癌细胞上皮间质(epithelial-mesenchymal transition,EMT)化的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌细胞FE1.2、FE1.3中TGM1 mRNA的表达水平。将含TGM1 cDNA全长的重组载体质粒pCMV3-TGM1-GFPspark转染至乳腺癌FE1.2细胞中,用潮霉素进行筛选,获得稳定的过表达TGM1基因的FE1.2细胞株。将空载体质粒pcDNA 3.1(-)转染至乳腺癌FE1.2细胞中,用遗传霉素(G418)进行筛选。将转染pCMV3-TGM1-GFPspark的FE1.2细胞设为实验组,将转染空载体质粒的FE1.2细胞作为阴性对照组,将未经任何转染的FE1.2设为空白对照组。转染超过48小时后于倒置光学显微镜下观察转染后细胞形态学变化。随后,采用MTT法记录各组细胞的增殖速率变化,了解TGM1基因过表达对乳腺癌细胞FE1.2增殖能力的影响。采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法分别检测各组细胞中上皮间质化相关分子标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)和波形蛋白(Vimentin,Vim)及细胞周期调节蛋白D1(Cyclin-D1),β-链蛋白(β-catenin)的蛋白与mRNA水平变化。利用FCM法检测转染pCMV3-TGM1-GFPspark后细胞粒径的变化情况。利用细胞划痕实验检测细胞迁移能力变化。结果:乳腺癌细胞株FE1.3中TGM1基因的表达量明显高于FE1.2细胞株(P<0.001)。将pCMV3-TGM1-GFPspark转染至乳腺癌FE1.2细胞后,该组细胞中TGM1的蛋白表达水平及mRNA水平显著上调(蛋白:P<0.01,mRNA:P<0.001),证明转染后成功构建过表达TGM1基因的FE1.2细胞组。实验组细胞形态发生明显变化,由间质细胞形态向上皮细胞形态转变。FCM法检测显示细胞粒径发生变化。细胞划痕实验证明过表达TGM1后细胞迁移能力受到抑制(P<0.05)。E-cad的mRNA水平显著上调(P<0.01),蛋白水平无变化。Vim mRNA水平及蛋白表达水平明显显著下调(P<0.001,P<0.01),β-catenin蛋白表达水平轻微下调(P<0.01),mRNA水平无明显差异(P>0.05)。以上结果提示TGM1基因与乳腺癌细胞EMT有明显相关性,且对EMT过程有抑制作用。Cyclin-D1 mRNA水平显著上调(P<0.01),蛋白水平无显著变化(P>0.05),细胞增殖受到显著抑制(24h:P<0.01,48h和96h:P<0.001),提示TGM1或许与细胞周期调控有关。结论:TGM1基因能够抑制乳腺癌细胞FE1.2上皮间质化及细胞增殖。