转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响

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本研究用大鼠动物模型,探讨转人乳铁蛋白(human lactoferrin, hLF)基因的山羊乳对动物生长、代谢、部分免疫指标及肠道组织形态的影响,以评价转hLF基因山羊乳的安全性。1重组山羊乳中乳铁蛋白的检测随机选取泌乳期的转hLF基因波尔山羊和普通波尔山羊各六只,分别于产后3d、7d、14d、28d采集乳样。乳样在4℃,3500rpm离·心10min,除去乳脂;用考马斯亮蓝染料结合分析法--Bradford法测定脱脂乳中总蛋白质浓度,SDS-PAGE比较两种乳中蛋白质组分的差异,Western blot分析两种乳中乳铁蛋白(human, LF)的表达。结果表明:LF在泌乳初期高表达,且不同泌乳阶段转hLF基因的山羊乳中LF含量均高于普通山羊乳。2转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响30只清洁级SD大鼠,雌、雄各半,随机分为3组,转基因乳组每天两次灌喂转hLF基因山羊乳1mL/100g体重(蛋白浓度0.93g·mL-1),普通乳组同一时间按上述剂量灌喂普通山羊乳(蛋白浓度0.93g·ml-1),生理盐水组灌喂灭菌生理盐水;自由采食、饮水,连续15天;颈部采血致死,收集血清。利用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶终点比色法、赖氏法、脲酶法、除蛋白法、CE-COD-POD比色法等分别测定大鼠血清中血糖(Blood glucose, BG)、谷草转氨酶(Glutamic-oxalacetic transaminase, GOT)及谷丙转氨酶(Glutamic-pyruvic transaminase, GPT)、尿素氮(Serum urea nitrogen, SUN)、血肌酐(Serum creatinine, Scr)、血清总胆固醇(Total cholesterol, TC)含量或活性;放射性免疫分析法检测大鼠血清中胰岛素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon, Glu)、三碘甲状腺素(Triiodothyroxine, T3)、甲状腺素(Thyroxin, T4)水平。结果显示:灌喂转hLF基因的山羊乳显著提高了雌、雄大鼠的日增重,其中与生理盐水组相比P<0.01,与普通乳组比P<0.05,而普通乳组与生理盐水组相比差异不显著;灌喂转基因或普通山羊乳对其他表观及生化指标均无明显影响(P>0.05)。试验结果表明:短期灌喂转hLF基因的山羊乳能够促进大鼠的生长,但对大鼠的代谢机能没有显著影响。3转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠肠道及部分免疫指标的影响放射免疫分析法检测大鼠十二指肠粘膜中分泌性免疫球蛋白A(Secreting typeImmunoglobulin A, SIgA)及血清中白介素-2(Interleukin-2, IL-2)水平,H.E染色法观察大鼠十二指肠显微结构,并统计肠粘膜长度;试验结果显示:转hLF基因的山羊乳对雌、雄大鼠肠粘膜中的SIgA及血清中IL-2水平不产生显著影响,但是能够促进大鼠肠粘膜生长。研究结果表明,转hLF基因的山羊乳对大鼠的部分重要免疫指标没有负影响,但能通过促进肠粘膜生长,增加大鼠对营养物质的消化、吸收能力。
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