目的:上呼吸道感染是威胁人类健康的常见感染性疾病,鼻黏膜屏障功能下降是其发生和发展的重要原因之一,为探究影响鼻黏膜屏障功能的部分因素并考察中医临床常用辛凉解表代表方剂银翘散防治上呼吸道感染的作用,本课题采用寒冷刺激、脂多糖滴鼻刺激,探究温差及炎症对小鼠鼻黏膜屏障功能的影响,并考察了银翘散的作用。方法:1.寒冷刺激对小鼠鼻黏膜免疫屏障功能的影响将雄性KM种小鼠,随机分为正常组、模型组。所有动物造模前禁食不禁水12h,正常组不予任何刺激;各模型组将动物置于-20℃环境中1h,再转入25℃环境中30min,循环两次,造模结束后及时给予食物和水。模型组于寒冷刺激后24h麻醉处死,在显微镜下仔细剥取鼻黏膜组织,Western-blot法检测鼻黏膜组织中IgA和IFN-λ的蛋白表达。2.寒冷刺激对小鼠鼻黏膜物理屏障的影响将雄性KM种小鼠,随机分为正常组、模型组。所有动物造模前禁食不禁水12h,正常组不予任何刺激;各模型组将动物置于-20℃环境中1h,再转入25℃环境中30min,循环两次,造模结束后及时给予食物和水。模型组于寒冷刺激后0h、3h、9h、1d、3d、5d每个时间点麻醉处死10只动物,在显微镜下仔细剥取鼻黏膜组织,Western-blot法检测鼻黏膜组织中TJs相关蛋白Occludin、Claudin4的蛋白表达。3.脂多糖滴鼻诱导炎症刺激对小鼠鼻黏膜屏障的影响将雄性KM种小鼠,随机分为正常组、模型组。所有动物造模前禁食不禁水12h,正常组缓慢滴鼻PBS(20μl/20g),模型组分别缓慢LPS(2mg/kg)滴鼻一次至七次,造模结束后正常给予水和食物。模型组分别于造模后1d、3d、5d、7d每个时间点麻醉处死8只动物,在显微镜下仔细剥取小鼠鼻黏膜组织,Western-blot法检测小鼠鼻黏膜中IgA、Occludin、Claudin4、Claudin5的蛋白表达。4.银翘散对LPS多次滴鼻刺激小鼠鼻黏膜屏障的影响将雄性KM小鼠,随机分为正常组、模型组、低剂量银翘组和高剂量银翘组。所有动物造模前禁食不禁水12h,正常组缓慢滴鼻PBS(20μl/20g),模型组和银翘散组缓慢滴鼻LPS(2mg/kg),每天1次。造模结束后正常在每天滴鼻刺激后6h银翘组灌胃给予小鼠低剂量或高剂量银翘散进行干预,正常组和模型组灌胃给予蒸馏水,在第5天和7天每个时间点麻醉处死10只动物,在显微镜下仔细剥取小鼠鼻黏膜组织。Western-blot检测法检测小鼠鼻黏膜中IgA和Occludin的蛋白表达。结果:1.寒冷刺激对小鼠鼻黏膜免疫屏障功能的影响KM种小鼠置于-20℃环境中1h,再转置25℃环境中30min,反复循环2次,造模结束后正常给予水和食物,24h取小鼠鼻黏膜组织,结果显示,模型组动物鼻黏膜中IgA、IFN-λ蛋白表达明显下降。2.寒冷刺激对小鼠鼻黏膜物理屏障的影响KM种小鼠置于-20℃环境中1h,再转置25℃环境中30min,反复循环2次,造模结束后正常给予水和食物,24h取小鼠鼻黏膜组织,结果显示,模型组动物鼻黏膜中Occludin、Claudin4蛋白表达无明显变化。3.脂多糖滴鼻诱导炎症刺激对小鼠鼻黏膜屏障的影响KM种小鼠每天滴鼻脂多糖刺激,造模结束后正常给予水和食物,第3天、第5天、第7天时取小鼠鼻黏膜组织,结果显示,模型组动物鼻黏膜中Occludin蛋白表达明显下降。4.银翘散对LPS多次滴鼻刺激小鼠鼻黏膜屏障的影响KM种小鼠每天滴鼻脂多糖刺激,造模结束后正常给予水和食物,6h后灌胃给予银翘散(24.18g生药/kg,72.54g生药/kg)进行干预,第5天、第7天时取小鼠鼻黏膜组织。结果显示,低剂量和高剂量的银翘散持续给药7天,可提高脂多糖滴鼻刺激小鼠鼻黏膜中下降的Occludin蛋白表达。结论:通过本课题的研究,发现寒冷刺激可导致小鼠鼻黏膜免疫屏障中免疫效应分子IgA和IFN-λ蛋白的表达明显降低。脂多糖多次滴鼻诱导持续炎症刺激可降低物理屏障中紧密连接蛋白Occludin的表达,增加上皮细胞通透性,同时也可降低鼻黏膜免疫屏障功能。银翘散在上呼吸道感染中的治疗作用与其提高小鼠鼻黏膜Occlduin蛋白的表达,降低上皮屏障的通透性,并促进免疫效应分子IgA蛋白的表达有关。