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目 的:抑郁症属于情感精神障碍疾病,临床表现以情绪低落、精神迟滞为核心症状,伴有记忆力减退等认知症状,以及食欲不佳、疲劳乏力等躯体症状,具有高复发率。临床上抑郁症与冠心病可互为因果、相互影响,抑郁症合并冠心病属于“双心病”的范畴,是双心医学中常见病与多发病,本研究以中医理论“心脑相关”为基础,“气血相关”为纲纪,认识“双心病”（即抑郁症合并冠心病）发病机理及“养血益心”针刺疗法治疗作用;并开展体内实验验证“养血益心”针刺疗法对“双心病”的作用疗效,主要选择以缺氧、血管新生、神经营养因子等可能映射中医“气、血”的分子指标来探究心脑间各因子间的相关性及该疗法调控影响;以及基于缺氧诱导因子（Hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）信号通路揭示“养血益心”针刺疗法治疗双心病大鼠的可能作用机制,旨在为“双心病”的防治及中医“心脑相关”、“气血相关”理论体系寻求现代科学证据支持。材料与方法:1.论文一:梳理古今中外双心病相关文献,综合分析“双心病”（即抑郁症合并冠心病）的发病机理及“养血益心”针刺疗法治疗作用。2.论文二:“养血益心”针刺疗法对双心病模型大鼠心功能与抑郁状态的作用研究。构建双心病模型大鼠,将60只雄性SD大鼠随机分为五组:空白组、模型组、针刺组、中药组、西药组,每组12只。空白组与模型组采用同针刺组相同时间,相同强度的抓取及捆绑固定,除空白组外,模型组、针刺组、中药组、西药组的大鼠均采用慢性不可预知温和刺激（Chronic unpredictable mild stress,CUMS）进行抑郁症大鼠模型造模,对抑郁模型造模成功的大鼠进行冠心病模型造模,制备冠心病模型采用一次性多点位（双腹股沟区）注射盐酸异丙肾上腺素（Isoproterenol,ISO）溶液,随机选取两只进行模型评价,将双心病模型造模成功的大鼠,除模型组外,分针刺组、中药组、西药组进行干预治疗,针刺组穴位为每日针刺“百会”、“内关”、“足三里”、“三阴交”、“太冲”五穴,采用疏密波,频率2-20HZ,电流2-3mA,电流强度以大鼠前后肢出现与电针频率相一致的轻微颤动为宜,留针15min,连续21天。西药组采用舍曲林组每日8时2mg·100g-1·d-1剂量灌服,连续21天。中药组采用“双心病”经验方,每日8时按2mg·100g-1·d-1剂量灌服中药煎剂,连续21天。模型组每日8时灌服等体积生理盐水,连续21天,应用糖水偏嗜实验（Sucrose preference test,SCT）、强迫游泳实验（Forced swimming test,FST）、旷场实验（Open field test,OFT）观察各组大鼠的行为学及运动模式变化。运用苏木精伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察心肌细胞形态学变化;酶联免疫法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,Elisa）检测血浆精氨酸加压素（Arginine Vasopressin,AVP）、心钠素（Atrial natriuretic peptide,ANP）的表达水平;采用 Elisa法检测心肌组织血管紧张素（Angiotensin Ⅱ,ANG Ⅱ）、B型钠尿肽（Brain natriuretic peptide,BNP）的表达水平、运用HE染色法观察海马神经元形态学变化;检测心电图ST段变化。蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）检测海马脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）、五羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、多巴胺（Dopamine,DA）含量;免疫组化法（Immunohistochemistry,IHC）检测海马 BDNF、NGF;逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain,RT-PCR）检测海马BDNF mRNA表达水平。3.论文三:“养血益心”针刺疗法对双心病大鼠“气血失调,心脑失通”相关指标的作用研究。构建双心病模型大鼠,造模及干预方法同论文二。检测血清凝血因子（Coagulation Factor,Ⅷ）、血小板—内皮细胞粘附分子（Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31）、CD34 含量、IHC 与 WB 法检测心肌、血清以及海马中细胞HIF-1α水平。4.论文四:基于HIF-1α信号通路探究养血益心法针刺疗法对双心病大鼠的作用机制。构建双心病模型大鼠,造模及干预方法同论文二。IHC与WB法检测心肌以及海马中胞内磷脂酰肌醇激酶（Phosphoinositide 3-Kinase,PI3K）、丝氨酸/苏氨酸激酶激酶（serine/threonine-protein kinase,AKT）、HIF-1α、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达水平;Elisa法检测心肌、血清以及海马中PI3K、AKT蛋白总量、HIF-1α、VEGF、血管内皮生长因子受体2（VEGF-Receptor 2,VEGFR-2）水平。结 果:1.论文一:从中医“双心病”的形成和发展、中医“双心病”的发病机理认识、“气血调和、心脑互通”对“双心病”治疗的重要性、基于“心脑相关、气血相关”理论“养血益心”针刺疗法对“双心病”的有效性四个方面论证了“双心病”的病机与“养血益心”针刺疗法的可行性。2.论文二:成功复制双心病大鼠模型;SCT检测结果显示,经过治疗后,与模型组比较,针刺组大鼠糖水偏爱指数显著上升（P＜0.01）;OFT结果显示与模型组比较,针刺组总运动格子数、站立次数、水平穿越格子均呈现增加（P＜0.01）,以水平穿越格子次数增加最显著（P＜0.01）;提示“养血益心”针刺疗法能有效改善双心病模型大鼠抑郁状态。各组大鼠心肌AVP、ANP检测结果显示:与空白组比较,模型组AVP、ANP表达水平升高（P＜0.01）,差异有统计学意义;与模型组比较,针刺组、中药组、西药组AVP、ANP表达水平降低（P＜0.01）,差异有统计学意义,提示“养血益心”针刺对心功能具有改善作用。各组大鼠血管紧张素（ANG Ⅱ）、B型钠尿肽（BNP）检测结果显示:与空白组比较,模型组ANGⅡ、BNP表达水平升高（P＜0.01）,差异有统计学意义;与模型组比较,针刺组、中药组、西药组ANGⅡ、BNP表达水平降低（P＜0.01）,针刺组尤以BNP降低最为显著,差异有统计学意义,提示“养血益心”针刺疗法、中药及西药可以有效改善双心病模型大鼠的心肌缺氧、血管紧张状态。与模型组相比,针刺组大鼠海马区BDNF、NGF、5-HT、DA表达高于模型组（P＜0.05）,IHC与WB结果显示与Elisa检测结果一致,提示“养血益心”针刺疗法对脑有保护作用,同时提示“养血益心”针刺疗法可能是影响BDNF在海马神经元内表达的重要影响因素。3.论文三:与模型组比较,针刺组、中药组和西药组的大鼠血清中Ⅷ、CD31、CD34含量显著升高（P＜0.01）,差异有统计学意义;提示“养血益心”针刺法对大鼠心功能的改善可能是通过增强“气血失调,心脑失通”相关的指标表达实现的,与模型组比较,“养血益心”针刺疗法可以提高心肌、海马、血清中HIF-1α水平,提示“养血益心”针刺疗法对心缺氧状态的改善可能是通过氧感受器HIF-1α调控实现的,同时提示“养血益心”针刺疗法对“气血失调,心脑失通”相关指标BDNF、NGF、5-HT、DA等脑源性营养因子与神经递质的表达的影响,与氧感受器HIF-1α的表达密切相关。4.论文四:与模型组相比,针刺组、中药组与西药组可调控PI3K/AKT表达,提高心肌、海马、血清中HIF-1α水平,上调VEGF、VEGFR-2水平（P＜0.01;P＜0.05）,提示PI3K/AKT/HIF-1α可能是“养血益心”针刺疗法调控“气血失调,心脑失通”相关的指标,从而改善双心病模型大鼠抑郁状态与改善心功能,治疗双心病的潜在深层作用机制。结 论:1.“心脑失调,气血失和”为“双心病”的基本病机,当以“心脑互通、气血调和”为治疗原则以达身心同调。2.结合经穴-经脉-脏腑相关性原理的“养血益心”针刺疗法能改善双心病模型大鼠心功能、抑郁行为及保护脑组织损伤。3.基于氧感受器的功能接近“气”的功能生物学实质,CD31、CD34相关指标接近于“血”的功能生物学实质,得出“养血益心”针刺疗法可能是通过调节氧感受器HIF-1α、血管新生指标VEGF以及Ⅷ、CD31、CD34实现“心主神明”功能的恢复的结论。4.HIF-1α起中间介导作用,引起级联反应,“养血益心”针刺疗法深层作用机制可能是通过PI3K/AKT/HIF-1α信号通路发挥行气活血的功能,从而实现心脑互通。