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第一部分利用定量流式细胞术比较PTEN在急性白血病患者和正常人中的表达差异目的:研究肿瘤抑制基因PTEN在急性白血病患者和正常人骨髓细胞中的表达情况,并比较其差异。方法:收集36例初发急性白血病患者和5例正常人的骨髓细胞,利用定量流式细胞术,通过Kolmogorov-Smirnov (KS)分析,检测PTEN表达情况。结果:正常人骨髓淋巴细胞、粒细胞、单核细胞PTEN表达的D值分别为(0.93±0.05),(0.97±0.02)和(0.95±0.03)。36例初发的急性白血病患者中,26例急性髓细胞白血病(AML)患者(1例M0,2例M1,11例M2,3例M3,6例M4,2例M5,1例M6)的骨髓原始细胞均检测到PTEN的表达,除1例M4和2例M5患者PTEN表达与正常对照组的接近,其余患者PTEN表达均较正常对照组降低,但是各个样本PTEN的表达表现出很大的差异性。8例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者的骨髓原始细胞PTEN的表达明显缺失,D值为(0.51±0.05)。2例急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者的骨髓原始细胞PTEN表达的D值为( 0.74±0.02)。结论:1.AML患者骨髓原始细胞均检测到PTEN的表达,但较正常对照组下调,且各个样本PTEN的表达表现出很大的差异性。AML患者骨髓原始细胞PTEN表达和FAB分型之间的联系是否具有统计学意义还需进一步研究。2.PTEN的表达明显下调或缺失在B-ALL中是一个常见现象。第二部分B-ALL患者PTEN表达缺失及其启动子甲基化状态关系的研究目的:探讨抑癌基因PTEN在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血单个核细胞中的表达缺失及其与启动子甲基化状态之间的关系。方法: 24例初发B-ALL患者的外周血单个核细胞和25例正常人外周血单个核细胞,利用定量流式细胞术,通过Kolmogorov-Smirnov (KS)分析,检测PTEN表达情况后,提取基因组DNA,采用MSP方法检测PTEN启动子甲基化状态。进而将外周血单个核细胞在体外培养过程中,以DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2’脱氧胞嘧啶进行处理,观察其对B-ALL标本中PTEN的表达的影响。结果:25例健康供者外周血单个核细胞均表达PTEN,KS分析时D值为0.941±0.017,而24例B-ALL患者中22例(91.6%)外周血单个核细胞PTEN的表达明显缺失,D值仅为0.546±0.115,两者差异具有显著性意义(P<0.01);正常人和PTEN高表达的B-ALL患者外周血单个核细胞中未发现PTEN启动子发生甲基化修饰,而PTEN表达缺失的B-ALL患者中有5例(22.7%)出现PTEN启动子甲基化,将其单个核细胞培养时以5-氮-2’脱氧胞嘧啶处理4天,PTEN表达得以明显升高。讨论:1.PTEN的表达明显下调或缺失在B-ALL中很常见2.PTEN启动子甲基化导致的PTEN表达缺失对B-ALL的发生可能起到重要的作用。第三部分STI571治疗2例携带e19a2的加速期CML患者的细胞遗传学改变目的:研究携带e19a2融合转录方式CML患者的临床特征及其与临床预后之间的关系,以及STI571对其治疗的效果。方法:两例加速期CML患者行STI571治疗,检测e19a2的表达情况,并定期进行骨髓细胞遗传学、巢式RT-PCR、FISH检测。结果:两例患者均携带e19a2,第1例患者经9个月的STI571治疗(600mg/天)后,细胞遗传学检查未见Ph染色体,巢式RT-PCR也仅检测到极少量的e19a2融合基因。第2例患者经6个月的STI571治疗(600mg/天)后,细胞遗传学检查未见Ph染色体和+der(22)t(9;22),通过FISH仅在5%的间期核中检测到+der(22)t(9;22)。讨论:1.e19a2可能与临床预后不良的CML相关联。2.STI571治疗对加速期的携带e19a2的患者依然有效。