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本项研究在已经建立的富有柿叶片的高频再生体系的基础上,对影响根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导富有柿叶片遗传转化的条件进行了探索。通过优化转化条件,建立了富有柿叶片遗传转化体系;PCR检测结果初步表明,已获得了ACC合成酶的RNAi的转基因植株。主要研究结果如下:1.研究了选择抗生素壮观霉素和抑菌剂头孢霉素对叶片直接分化不定芽的影响。结果表明,叶片外植体对壮观霉素非常敏感,在分化培养基中附加30mg/L的壮观霉素即可完全抑制不定芽的分化;在生根试验中,确定Sp生根压力为20mg/L。头孢霉素叶片外植体的分化没有严重影响,300mg/L的头孢霉素就能较好的抑制农杆菌的生长,且不定芽诱导率可达到46.3%。2.建立了以富有柿叶片为转化受体的根癌农杆菌遗传转化体系,详细探讨了预培养时间、共培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间、AS浓度等因素对于T-DNA转化的影响,并优化了转化条件。结果表明,选择预培养3d的叶片,用OD600为0.4的菌液侵染7min后,转到1/2MS+ZT 1.0mg/L+TDZ 0.5mg/L+AS150μmol/L的培养基上共培养4d,再通过延迟筛选4d,可获得较好的转化效果,抗性芽率最高的可达13.64%。3.通过建立的遗传转化体系,获得246株抗性苗,其中4株经PCR检测呈阳性。4.研究了暗培养时间、蔗糖浓度、光照强度、闭瓶锻炼时间对培育富有柿健壮生根苗的效果。结果表明,在蔗糖浓度为20g/L的培养基中生长的试管苗,暗培养8d,在30 000lx的光照下,闭瓶锻炼21d,对富有柿培育健壮生根苗有很大的促进作用。此条件下,培育的生根苗较好:生根率高,根系发达,试管苗生长健壮,芽点饱满。5.初步探讨了温度、湿度和移栽基质对移栽成活率的影响,生根试管苗移栽到以蛭石:珍珠岩=1∶1的基质中,进行过渡移栽。保持小拱棚温度在25~30℃。移栽前10d,保持棚内湿度在90%~100%,能获得较好的移栽成活率。