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目的:研究溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L,CTSL)在调控人肺癌A549细胞顺铂(cislpatin,DDP)和紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药中的作用及其调控机制。方法:本实验选用A549细胞,A549耐顺铂细胞(A549/DDP)和A549耐紫杉醇细胞(A549/TAX)进行以下实验。首先,分别用顺铂和紫杉醇处理A549细胞,western blot检测CTSL的表达;MTT和集落形成实验检测A549/DDP和A549/TAX细胞的耐药性,western blot检测耐药细胞中CTSL的表达。CTSL靶向siRNA干扰A549/DDP和A549/TAX细胞构建低表达CTSL细胞株,慢病毒感染A549细胞构建过表达CTSL的细胞株,MTT或集落形成实验检测干扰或过表达CTSL后细胞对顺铂或紫杉醇的耐药性变化;鬼笔环肽染色法观察细胞骨架结构的改变;细胞划痕实验及transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变;western blot检测上皮间质转化(EMT)标志物(E-cadherin、cytoskeratin 18、vimentin和N-cadherin)的表达;western blot和q-PCR实验检测EMT相关转录因子snail、slug、ZEB1和ZEB2的表达变化。皮下接种感染过表达CTSL慢病毒的A549细胞,构建过表达CTSL的裸小鼠移植瘤模型,western blot和免疫组化检测CTSL、EMT相关蛋白和EMT相关转录因子的表达情况。结果:顺铂和紫杉醇可诱导A549细胞中CTSL表达;与正常A549细胞相比,A549/DDP和A549/TAX细胞中CTSL表达量增加,细胞骨架重构,细胞的迁移、侵袭能力增强;上皮标志物(E-cadherin和cytoskeratin 18)表达减少,间质标志物(N-cadherin和vimentin)以及EMT相关转录因子表达增加。CTSL靶向siRNA干扰A549/DDP和A549/TAX细胞可使细胞中骨架蛋白明显减少、细胞的迁移、侵袭能力减弱,上皮标志物表达增加,间质标志物表达减少,EMT相关转录因子表达减少。过表达CTSL慢病毒感染A549细胞可使细胞中骨架蛋白表达增加,细胞的迁移、侵袭能力减弱,上皮标志物减少,间质标志物增加,EMT相关转录因子表达增加。结论:CTSL通过调控EMT相关蛋白及转录因子介导了A549细胞对顺铂和紫杉醇耐药。