论文部分内容阅读
女性体细胞组织是由来自父系、母系两类细胞构成的嵌合体，部分细胞中父本X染色体有活性，其余细胞中母本X染色体有活性。理论上父本X染色体连锁基因与母本X染色体连锁基因的理论数量应为1：1。这一比率发生显著偏差，称为X染色体失活偏移（skewed X—chromosome inactivation，SXCI）。因为男性只有一条X染色体，男性不会发生SXCI。
脑胶质瘤发病率居脑瘤首位、死亡率高，但目前尚不能准确检测其易感性。已证明，卵巢癌、乳腺癌、肺癌、食管癌的早期发生与女性血细胞X染色体失活偏移（SXCI）有关。此前的预试验中，我们对99例正常女性进行了血细胞SXCI检测，同时，采用标准化的中医体质自我评价量表及评分标准对这些个体进行了“体质”测量。正常女性体质分型间SXCI发生明显有差异。其中，气虚质、湿热质与气郁质个体SXCI发生率较高。提示：血细胞SXCI与女性“体质”分型可能有关。我们推测女性“体质”、SXCI的共分析可能早期筛查脑胶质瘤易感对象。
目的：本项目拟①研究SXCI与“体质”关联性，分析SXCI是否是女性脑胶质瘤易感因素，探讨女性脑胶质瘤——“体质”—SXCI关联；②进一步明确正常女性、女性脑胶质瘤患者雄激素受体（AR）基因的CAG短串联重复序列（short—tandem repeat，STR）的重复次数n值的分布范围，初步探讨女性脑胶质瘤与CAG STR重复数目之间的关系。
方法：本研究采集15岁以上、获知情同意的1103例正常女性个体，采用标准化中医体质量表计算各亚量表分数，判定个体为平和质或偏颇体质；同时，采集上述1103例正常女性个体以及173例女性胶质瘤患者的外周全血标本，对患者中49例女性胶质瘤患者的瘤组织标本激光显微切割，获取瘤旁正常组织标本。从全血、瘤旁正常脑组织标本提取基因组DNA，经HpaⅡ消化后，扩增AR基因，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显示结果，比较HpaⅡ消化前后AR基因扩增产物的强度差异，计算其校正比值（CR）并确定SXCI的发生；比较年龄匹配的正常女性个体、女性胶质瘤患者SXCI的发生；对正常女性个体中的1101例以及166例女性胶质瘤患者的全血标本，应用PCR—变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，进行AR基因的CAG STR n值的比较。
结果：
1）1100例正常女性做有效问卷，其中1001例具有AR基因CAG STR多态性，标本杂合率为91%（1001/1100）。女性胶质瘤患者组血细胞标本杂合率为96.0%（166/173）。如果将以上两组共1273例视作一个整体，杂合率为91.7%（1167/1273）；48例女性胶质瘤患者正常脑组织细胞标本具有AR基因CAG STR多态性，标本杂合率为98%（48/49）；
2）对1001例15岁以上女性正常个体的研究表明，以CR≥3为判断SXCI标准时，平和质、气虚质、阳虚质、阴虚质、痰湿质、湿热质、瘀血质、气郁质、特禀质组间SXCI的发生率分别为8.9%（33/370）、32.0%（48/150）、8.1%（5/62）、11.3%（6/53）、18.4%（16/87）、22.9%（19/83）、10.9%（5/46）、29.0%（29/100）与8.0%（4/50），发生率间有明显差异（P<0.05；X2=61.071）分型与SXCI关联系数为0.244（P<0.05）。上述九型体质中，气虚质、痰湿质、湿热质与气郁质SXCI发生率比较高，分别为32.0%、18.4%、22.9%与29.0%；
3）以CR≥3为SXCI标准时，20岁以下（含20岁）以及40岁以下（含40岁）年轻胶质瘤患者SXCI的发生率均显著高于年龄匹配的正常女性，20岁以下区间，分别为28.6%（10/35）和4.5%（6/133）（P=0.00015）；40岁以下区间，分别为23.6%（13/55）和5.1%（16/312）（P<0.0001）。采用CR≥10为SXCI标准，20岁以下（含20岁）、40岁以下（含40岁）胶质瘤患者SXCI发生率均高于相应年龄匹配的正常组，但差别尚未达到统计学显著性（P值分别为0.28和0.10）。无论采用CR≥3或≥10作为判断标准，40岁以上的胶质瘤患者和正常组的SXCI发生率均无显著差异（P值分别为0.28和0.59）。对所有患者以及年龄匹配的参照人群的SXCI发生率进行比较，二者无显著差异（P值分别为0.37和0.22）：
4）对有AR基因CAG STR多态性的48例女性胶质瘤患者的血细胞、脑组织细胞标本进行SXCI的判定。血细胞组标本CR值范围为1.3—7.2（2.50±1.41），脑组织组标本CR值为范围为1.2—8（2.80±1.42）。9例患者血细胞、脑组织细胞标本被确认同时发生SXCI（CR≥3）。相关性分析显示，血细胞、脑组织标本CR具有线性相关（Pearson相关系数为0.57，P<0.01）；
5）对1001例正常女性参照者以及166例胶质瘤患者进行了CAG STR重复数目测定。正常女性组上、下带CAG STRn值范围分别为15—33（22.14±4.45）和14—33（20.98±4.62）。女性胶质瘤患者组的上、下带CAG STRn值范围分别为15—30（22.05±3.95）和13—30（20.83±4.68）。无论是以上带计算（t=0.23，P=0.82），还是以下带计算（t=0.38，P=0.70），正常女性组、女性胶质瘤患者组CAG STR重复次数均无显著差异。
结论：血细胞SXCI与女性“体质”有关；血细胞、脑组织细胞SXCI发生具有一致性；女性血细胞SXCI可能与较年轻（≤40岁）胶质瘤患者的肿瘤发生有关；女性胶质瘤的发生可能与AR基因第一外显子CAG STR长度多态性无关。