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目的本课题旨在研究LASS2/TMSG-1基因是否通过线粒体凋亡途径促进人肺癌细胞发生凋亡及其具体机制。方法采用免疫组织化学染色方法,检测LASS2/TMSG-1与ATP6V0C、Bcl-2、Caspase-3蛋白在87例肺癌组织和25例正常肺组织中的表达情况,分析四者与肺癌患者临床病理指标及预后的相关性。运用慢病毒转染法将过表达LASS2/TMSG-1基因的LV-CERS2-RNAi(8649-2)转染A549细胞;随后采用Western-blot、荧光定量PCR来检测LASS2/TMSG-1在人肺癌细胞系A549中的表达情况;采用流式细胞仪结合TMRM荧光探针测定线粒体膜电位的变化及人肺癌细胞凋亡情况;应用ELISA法检测V-ATPase、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9在细胞中的表达水平。采用SPSS22.0软件分析数据,P<0.05(作为分析标准)认为差异显著。结果(1)通过免疫组织化学染色发现,LASS-2/TMSG-1蛋白在人肺癌组织中的表达(21/87,24.13%)明显低于在正常肺组织中的表达(15/25,60.00%);ATP6V0C蛋白在人肺癌组织中的表达(63/87,72.41%)明显高于在正常肺组织中的表达(7/25,28.00%);Bcl-2在人肺癌组织中的表达(55/87,63.21%)明显高于在正常肺组织中的表达(3/25,12%);Caspase-3蛋白在人肺癌组织中的表达(27/87,31%)明显低于在正常肺组织中的表达(23/25,92%);差异均具有显著性(P<0.05)。(2)LASS2/TMSG-1、Caspase-3在肺癌组织中的表达与分化程度、淋巴结转移明显负相关(均P<0.05);ATP6V0C、Bcl-2在肺癌组织中的表达与分化程度、淋巴结转移明显正相关(均P<0.05);并且LASS2/TMSG-1、V-ATPase在肺癌组织中的表达与肺癌组织类型有关,LASS-2/TMSG-1在腺癌中的表达率高于鳞癌,而ATP6V0C在鳞癌中的表达率较高。(3)LASS2/TMSG-1和ATP6V0C在肺癌组织中的表达呈负相关;ATP6V0C和Bcl-2在肺癌组织中的表达呈正相关。(4)淋巴结转移、LASS2/TMSG-1、ATP6V0C、Bcl-2和Caspase-3均是影响人肺癌术后生存的独立因素。(5)通过Western-blot和荧光定量PCR,发现LASS2/TMSG-1过表达组的mRNA和蛋白水平表达上升。(6)通过流式细胞术结合TMRM探针检测显示,过表达LASS2/TMSG-1基因会使线粒体膜电位水平下降,肿瘤细胞凋亡率增加。(7)采用ELISA分析LASS2/TMSG-1基因过表达后,肿瘤细胞内V-ATPase、抑凋亡蛋白Bcl-2的表达下降,上调了促凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达,与正常组和阴性对照组相比有统计意义(P<0.05)。结论LASS2/TMSG-1基因作为抑制肿瘤转移的基因,不仅可以抑制肿瘤的侵袭、转移,还可能通过HOX域与ATP6V0C亚基结合,降低V-ATPase的活性,使细胞内H~+浓度升高(酸化),进而使线粒体发生级联反应,导致线粒体膜电位降低,线粒体的超微结构发生变化,线粒体凋亡通路中的相关蛋白释放,促进人肺癌细胞的凋亡。