该课题采用急性分离的技术,观察了急性分离的海马CA1区神经元上ASICs电流特性;并结合RT-PCR、Western blot、免疫组化、细胞培养及质粒的转化和转染等实验方法,进一步研究了缺血后各个ASICs亚基的变化及可能的机制.主要的实验结果如下:1.急性分离的海马CA1区神经元上ASICs样电流的电生理学特性 该实验中,我们观察到当胞外的pH降低到6.8时,可以激活急性分离的海马CA1区神经元产生一个内向电流,并随着pH的降低,该电流的峰值也逐渐增大,在pH 4.5时达到最大,EC<,50>接近于6.1;药理学研究发现,该电流对TTX不敏感,但可以被amiloride——DEG/ENaC通道非特异性的阻断剂,浓度依赖性的抑制.2.全脑缺血期间CaMKII和NMDA受体激活介导ASIC1a亚基磷酸化 大量的研究表明,表达在外周神经系统中的ASICs可以感受信息传递过程中pH的变化,而对感觉信息的传递过程进行调节.中枢神经系统中ASICs的分布非常广泛,组织酸化也是生理、病理情况下最常见的现象之一.基因敲除的实验提示生理条件下,ASIC1与突触可塑性有关,参与了LTP的产生机制.但对病理条件下ASICs的功能研究不是很多.该实验就采用实验性缺血、和全脑缺血的模型,从单细胞水平和在体水平两个层次观察了缺血刺激对海马神经元上ASICs各个亚基的调节及可能的机制.结果提示在缺血期间ASIC1a可以作为NMDA受体的下游物质介导部分的神经毒效应.临床研究表明,防治缺血/缺氧的药物,如谷氨酸受体的拮抗剂,由于存在广泛的副作用而导致疗效不理想甚至失败,而该文观察到的缺血期间ASIC1a的作用可以为缺血治疗药物的研发提供新的实验依据和药物靶点.