【摘 要】
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奶牛乳房炎是养殖过程中常见且高发的疾病,常导致奶牛产奶量下降,饲养成本增加及奶牛淘汰率上升,严重影响奶牛业的发展。病原微生物感染是引起奶牛乳房炎的主要原因,兽医临床上主要通过抗生素来治疗奶牛乳房炎。随着抗生素的大量应用,细菌耐药和药物残留等问题愈发严重。因此,寻找一种有效、低毒的抗生素替代物迫在眉睫。丹皮酚（Paeonol）是一种中药提取物,具有抗菌消炎、抗氧化应激、抗肿瘤等药理作用。本研究主要通
【基金项目】
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河北省重点研发计划-奶牛振兴重大技术创新专项“奶牛主要常见疾病高效综合防治及安全用药关键技术研究”项目号:19226611D；
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奶牛乳房炎是养殖过程中常见且高发的疾病,常导致奶牛产奶量下降,饲养成本增加及奶牛淘汰率上升,严重影响奶牛业的发展。病原微生物感染是引起奶牛乳房炎的主要原因,兽医临床上主要通过抗生素来治疗奶牛乳房炎。随着抗生素的大量应用,细菌耐药和药物残留等问题愈发严重。因此,寻找一种有效、低毒的抗生素替代物迫在眉睫。丹皮酚（Paeonol）是一种中药提取物,具有抗菌消炎、抗氧化应激、抗肿瘤等药理作用。本研究主要通过脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）建立奶牛乳腺上皮细胞（Bovine mammary epithelial cells,BMECs）和小鼠乳腺组织炎性模型,探究丹皮酚对乳腺组织及上皮细胞的保护作用,为奶牛乳房炎的治疗提供依据。正式试验前,取冻存的BMECs,复苏后观察细胞形态,通过CCK-8法检测不同浓度的丹皮酚对BMECs增殖的影响。结果显示,BMECs长势良好,呈铺路石状。姬姆萨染色后,可观察到细胞呈梭形,胞核呈蓝紫色。CCK-8法检测结果表明,200 mg/L以内的丹皮酚对细胞的增殖无毒性作用,本研究选取10、50、100mg/L的丹皮酚进行后续试验。本试验使用20 mg/L的LPS建立BMECs体外炎性模型,通过qPCR法检测BMECs中 IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX2 的 mRNA 表达;使用 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡的情况;使用试剂盒检测细胞SOD、GSH-Px的活性及MDA含量;Western Blot法检测NF-κB、MAPK和Nrf2通路中关键蛋白的表达。结果表明,与 LPS 组相比,BMECs 中 IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX2 的 mRNA表达含量显著降低,细胞凋亡数、MDA含量显著减少（P＜0.05）,SOD及GSH-Px活性显著升高（P＜0.05）。同时,LPS处理使BEMCs中IκBα、p65、jnk、p38、erk的磷酸化水平和Keapl表达水平显著升高（P＜0.05）,HO-1、NQO1、Nrf2表达水平显著降低（P＜0.05）,而丹皮酚处理组逆转了这些改变。其中以10.0mg/L丹皮酚处理BMECs作用效果最为显著。本试验使用200 mg/L的LPS建立小鼠乳房炎模型,分析小鼠乳腺组织病理变化,并使用试剂盒检测组织中IL-6、IL-1β、TNF-α含量和MPO活性。结果表明,LPS组小鼠乳腺组织出现明显的出血及红肿,乳腺腺泡壁明显增厚,腺泡腔中有大量巨噬细胞及中性粒细胞浸润,而丹皮酚处理组缓解了上述病理变化。丹皮酚处理组乳腺组织中IL-6、IL-lβ、TNF-α含量和MPO活性显著减少（P＜0.05）。其中以100 mg/kg灌胃剂量作用于小鼠乳腺组织抗炎效果最显著。综上所述,200 mg/L以内的丹皮酚对BMECs无毒性作用。100 mg/L丹皮酚可抑制由LPS诱导的BMECs中的炎性反应和氧化应激反应,抑制NF-κB和MAPK通路的活性,提高Nrf2通路活性,该浓度的丹皮酚对奶牛乳腺上皮炎性细胞的保护作用最佳。此外,100 mg/kg丹皮酚灌胃浓度可减弱LPS诱导的小鼠乳房炎的病理损伤,减轻小鼠乳腺组织的炎性反应。
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