【摘 要】
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诺如病毒（Norovirus,NoVs）可引发人类非细菌性急性肠胃炎,贝类是NoVs传播的主要载体,食用生的或加热不彻底的贝类易感染NoVs。食用NoVs污染的贝类易造成食源性疾病,引发食品安全问题。大量的调查研究结果表明,NoVs经过贝类的滤食会被富集起来,而生活中许多贝类引发的NoVs疫情与食用牡蛎有关。贝类中有类似人类组织血型抗原的NoVs受体,可与NoVs结合,常规的贝类净化加工方法很难将
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诺如病毒（Norovirus,NoVs）可引发人类非细菌性急性肠胃炎,贝类是NoVs传播的主要载体,食用生的或加热不彻底的贝类易感染NoVs。食用NoVs污染的贝类易造成食源性疾病,引发食品安全问题。大量的调查研究结果表明,NoVs经过贝类的滤食会被富集起来,而生活中许多贝类引发的NoVs疫情与食用牡蛎有关。贝类中有类似人类组织血型抗原的NoVs受体,可与NoVs结合,常规的贝类净化加工方法很难将NoVs从贝类体内除去。本研究制备了GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs P粒子,研究NoVs在贝类中的结合特性和消减控制贝类中NoVs污染的方法,最终为保障消费者贝类食用安全提供一些帮助。具体研究结果如下:1.GⅡ.4、GⅠ.5型诺如病毒P粒子的制备分别提取GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs的病毒RNA,逆转录成c DNA,用限制性内切酶将GⅡ.4、GⅠ.5的目的基因切下并扩增,插入表达载体p ET-28a（+）,将重组质粒p ET-28a（+）-GⅡ.4、p ET-28a（+）-GⅠ.5分别转化到大肠杆菌TOP10细胞,通过IPTG在37℃下诱导重组His标记的GⅡ.4、GⅠ.5蛋白表达4 h,用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和柱纯化后得到纯化的GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs P粒子,完成GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs P粒子的制备。2.GⅡ.4、GⅠ.5型诺如病毒P粒子与牡蛎类HBGAs结合特性分析与NoVs识别相关的是ABO型、分泌型及Lewis型等三种人类组织血型抗原,在对人的唾液表型鉴定后,得到已知表型的实验样本。抗体采用A、H、Lewis型HBGAs单克隆抗体。优化了ELISA实验方法,选用1%BSA作为封闭液封闭,选用5μg/m L浓度GⅡ.4、GⅠ.5型P粒子包被。将GⅡ.4、GⅠ.5型No V P粒子与人类唾液中的HBGAs结合后发现其结合能力与NoVs相似（P＜0.05）,可以代替GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs进行后续实验。将GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs P粒子与牡蛎类HBGAs结合,分析GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs与牡蛎类HBGAs结合模式,结果表明牡蛎中A型类HBGAs含量最多（P＜0.05）,GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs P粒子与牡蛎类A、H型HBGAs结合能力较强（P＜0.05）,GⅡ.4型NoVs比GⅠ.5型NoVs更容易与牡蛎类HBGAs结合（P＜0.05）。3.GⅡ.4、GⅠ.5型诺如病毒消减控制初步研究本研究尝试了两种不同的方法阻止GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs P粒子与牡蛎类HBGAs结合,以期达到消减控制NoVs的目的。牡蛎类HBGAs理论上可以被乳糖酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶水解为单糖,但体外实验结果显示,在酶的最适温度下裂解糖苷键并未增加还原糖含量（P＞0.05）,牡蛎类HBGAs仍然会与NoVs结合。通过肝素钠、乳糖、岩藻糖、柠檬酸等吸附剂与牡蛎类HBGAs竞争,阻止GⅡ.4、GⅠ.5型NoVs P粒子与牡蛎类HBGAs结合。随着吸附剂浓度的升高,吸附效果越强。其中岩藻糖、乳糖对GⅡ.4型NoVs P粒子吸附效果比肝素钠更好。岩藻糖、肝素钠对阻止GⅠ.5型NoVs P粒子与A、H型牡蛎类HBGAs结合效果比乳糖更好。乳糖能阻止Lewis型牡蛎类HBGAs与GⅠ.5型NoVs P粒子结合。肝素钠能阻止H型牡蛎类HBGAs与GⅠ.5型NoVs P粒子结合。柠檬酸作为酸性物质可能有杀灭病毒的作用,能阻止NoVs与牡蛎类HBGAs结合。本文从NoVs与贝类的结合特性方面进行研究,找寻能消减控制贝类中NoVs的吸附剂,希望借此建立有效可行的贝类中NoVs的消减控制技术,为消减贝类中NoVs污染及保障消费者贝类食用安全提供理论基础。
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