第一部分儿童细菌性脑膜炎多种病原菌快速诊断与临床特征研究　　 目的:建立儿童细菌性脑膜炎的多种病原菌的快速诊断方法,明确儿童细菌性脑膜炎病例中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及B型流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟双球菌、无乳链球菌、单核细胞增多性李斯特菌的感染状况;总结不同病原菌所致细菌性脑膜炎临床特征,比较肺炎链球菌脑膜炎与其它病原菌所致脑膜炎的异同。　　 方法:根据既往发表的文献改良设计5种常见病原菌特异性引物和Taqman探针。将其划分为3个组合,每个组合中包含一对分别用FAM(6-carboxyfluorescein)和HEX(6-carbox-y-2,4,4,5,7,7-hexachlorofluorescein)标记的探针。采用人类β球蛋白作为DNA提取和扩增效果的内对照。应用Lightcycler480平台采用Realtime-PCR建立多种病原菌检测方法,并应用该方法对2006年1月份到2009年9月份北京儿童医院感染内科收集的临床诊断为细菌性脑膜炎患儿的157例脑脊液标本进行检测。采用t检验和卡方检验比较肺炎链球菌脑膜炎病例与其它病原菌所致脑膜炎病例主要临床特征差异。　　 结果:这种Realtime-PCR检测方法特异性好,与其它常见病原菌包括:化脓性葡萄球菌、表皮葡萄球菌、缓症链球菌、牛链球菌、肺炎支原体、卡他莫拉菌、大肠杆菌和肠球菌以及人类基因组DNA间无交叉反应:对5种病原菌检测的敏感性依次为:肺炎链球菌的敏感性为4.9×101 CFU/ml,流感嗜血杆菌的敏感性为4.5×10-1 CFU/ml,B型流感嗜血杆菌的敏感性为4.4×100 CFU/ml,脑膜炎奈瑟双球菌的敏感性为3.6×10-1 CFU/ml,无乳链球菌的敏感性为3.0×102CFU/ml,单核细胞增多性李斯特菌的敏感性为1.3×102 CFU/ml。本研究对5种病原体的总检出率为24.20％(38/157),其中肺炎链球菌阳性病例共25例(15.92％,25/157),有23例为Realtime-PCR检测阳性,2例仅培养阳性；Realtime-PCR共检出7例(4.46％,7/157)流感嗜血杆菌,其中5例(71.43％,5/7)为血清型B,发现脑膜炎奈瑟双球菌4例((4/157,2.55％),无乳链球菌2例(1.27％,2/157),未检测到单核细胞增多性李斯特菌阳性病例。5种病原菌脑脊液涂片的阳性检出率仅为4.46％(7/157),其中革兰氏阳性球菌6例,革兰氏阴性双球菌1例；脑脊液仅培养出10例(6.37％,10/157)肺炎链球菌,其中8例Realtime-PCR肺炎链球菌同时阳性,其它病原菌培养结果均阴性。发热、抽搐、呕吐、颈抵抗阳性是细菌性脑膜炎患儿最常见的临床特征。肺炎链球菌脑膜炎与其它病原菌脑膜炎病例相比,除脑室膜炎出现的比例偏低外,其它所有指标包括听力损伤等均占有较高的比例(P>0.05),其中颈抵抗阳性、外周血白细胞计数异常、脑脊液白细胞计数(>500×106/L)、脑脊液蛋白含量(>500mg/L)、脑脊液糖含量(≦1.5mmol/L)等方面在两组间存在统计学差异(P<0.05)。　　 结论:这种Realtime PCR能够在脑脊液中进行多种病原菌同时快速检测,适用于抗生素部分治疗致脑脊液涂片、培养阴性的病例；肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟双球菌是引起我国儿童细菌性脑膜炎的主要病原菌；肺炎链球菌脑膜炎较其它病原菌脑膜炎病例较易出现典型细菌性脑膜炎临床特征改变。