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研究背景:肺癌是目前死亡率最高的疾病,其中约80%为非小细胞肺癌。针对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路的研究是当前的一种分子靶向治疗的研究热点。DMH4(6-[4-[2-(4-Morpholinyl)ethoxy]phenyl]-3-phenylpyrazolo[1,5-a]pyrimidine)是一种有效的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)抑制剂,与腺苷酸活化蛋白激酶相比,它是一种更加有效的血管内皮生长因子受体的抑制剂,它对血管生成具有更强的抑制作用。方法和结果:利用MTT比色法测定DMH4对细胞生长的抑制率,结果得出在DMH4浓度为1 ug/ml下,作用时间为24小时时,肺癌细胞H460、A549、成纤维母细胞MRC5和脂肪干细胞ADSC的生存率分别为75.10%、51.47%、106.74%和109.73%,表明DMH4对肺癌细胞H460和A549的抑制性很强,而成纤维母细胞MRC5和脂肪干细胞ADSC对DMH4不敏感;在作用时间为24小时时,DMH4浓度分别为0.25ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml时,肺癌细胞A549的生存率分别为77.25%、55.94%、51.47%、43.23%、42.82%、42.61%和40.04%,证明DMH4的抑制率随浓度的升高而增强。通过MTT比色法检测DMH4对肿瘤细胞的抑制率可知,DMH4的作用具有一定的细胞选择性,且具有一定的剂量依赖性。细胞划痕实验(Scratch Test)结果证明,DMH4对肺癌细胞H460和A549的迁移有一定的抑制作用。之后的流式细胞术检测(Flow Cytometry,FMC)了DMH4处理后用Annexin V/PI染色的肺癌细胞H460和A549的凋亡情况,发现了DMH4可以促进细胞早期凋亡的发生。用Western Blot蛋白免疫印迹法检测了1ug/ml的DMH4处理后肺癌细胞中磷酸化的VEGFR2有明显的下调,显示了DMH4抑制了VEGFR2及其对VEGFR信号通路的抑制作用。abcam公司的人体细胞凋亡抗体芯片(Human Apoptosis Antibody Array-Membrane)检测了43种细胞凋亡相关的蛋白,其中DMH4处理过的肺癌细胞A549中,各细胞凋亡相关蛋白的表达均明显升高,表明DMH4可能是通过影响VEGF信号通路促进细胞的凋亡。结论:终上所述,DMH4这种VEGFR2抑制剂,可以抑制肺癌细胞H460和A549的增殖及迁移,这种小分子化合物在肺癌的治疗方面有较好的研究价值及应用前景。