目的:筛选出前列腺癌中与GPC5相互作用的生长因子/受体配体成员,并初步探索他们之间的相互作用对调节肿瘤进展的潜在机制。方法:1.应用CO-IP技术和质谱分析技术,在前列腺癌细胞中筛选出与GPC5相互作用的生长因子。2.应用免疫荧光共聚焦技术,检测前列腺癌细胞中GPC5和其靶蛋白在细胞亚结构内的分布。3.应用免疫共沉淀技术提取GPC5-靶蛋白免疫复合物,后行蛋白印迹,验证GPC5与靶蛋白的相互作用。4.应用脂质体辅助质粒DNA转染技术,建立GPC5异常表达的前列腺癌细胞系。5.应用western blot技术,检测前列腺癌细胞GPC5异常表达后,细胞内其靶蛋白含量的变化。结果:1.以GPC5为诱饵蛋白的免疫共沉淀复合物中共检测出三种生长因子:HDGF、IGF2BP1、GRB2,其中HDGF为三个样品中均含有的生长因子,且其蛋白分值较高。2.免疫荧光共聚焦结果显示,GPC5和HDGF在细胞浆内分布有广泛重叠区域。3.以GPC5为诱饵蛋白的免疫共沉淀复合物中检测到HDGF的蛋白印迹,同时以HDGF为诱饵蛋白的免疫共沉淀复合物中也检测到GPC5的蛋白印迹。4.建立了稳转的GPC5过表达前列腺癌PC3细胞系。5.GPC5过表达后,前列腺癌PC3细胞内HDGF含量减少而其下游蛋白PI3-K及PAI-1含量增加。结论:1.HDGF为细胞膜表面糖蛋白GPC5在前列腺癌中的作用靶点。2.在前列腺癌中,GPC5可降低细胞内HDGF的水平,对HDGF的跨膜信号传导有潜在的抑制作用。